विवो में त्रि-आयामी प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके ज़ेब्राफिश लार्वा की संपूर्ण मस्तिष्क इमेजिंग

एक कशेरुक मॉडल जानवर के रूप में, लार्वा ज़ेबराफ़िश का व्यापक रूप से तंत्रिका विज्ञान में उपयोग किया जाता है और सेलुलर रिज़ॉल्यूशन पर पूरे मस्तिष्क की गतिविधि की निगरानी करने का एक अनूठा अवसर प्रदान करता है। यहां, हम तीन-आयामी प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके लार्वा ज़ेब्राफिश के पूरे मस्तिष्क इमेजिंग करने के लिए एक अनुकूलित प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं, जिसमें नमूना तैयारी और स्थिरीकरण, नमूना एम्बेडिंग, छवि अधिग्रहण और इमेजिंग के बाद विज़ुअलाइज़ेशन शामिल है। वर्तमान प्रोटोकॉल कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी और कस्टम-डिज़ाइन किए गए फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके 1 घंटे से अधिक समय तक सेलुलर रिज़ॉल्यूशन पर लार्वा ज़ेब्राफिश मस्तिष्क की संरचना और न्यूरोनल गतिविधि की विवो इमेजिंग में सक्षम बनाता है। प्रोटोकॉल में महत्वपूर्ण चरणों पर भी चर्चा की गई है, जिसमें नमूना चढ़ाना और स्थिति, अगारोस जेल में बुलबुला गठन और धूल को रोकना, और अगारोस जेल के अपूर्ण जमने और मछली के लकवाकरण के कारण छवियों में गति से बचना शामिल है। प्रोटोकॉल को कई सेटिंग्स में मान्य और पुष्टि की गई है। इस प्रोटोकॉल को लार्वा ज़ेबराफिश के अन्य अंगों की इमेजिंग के लिए आसानी से अनुकूलित किया जा सकता है।