In vivo Imaging dell'intero cervello delle larve di zebrafish mediante microscopia a fluorescenza tridimensionale

Come animale modello di vertebrato, i pesci zebra larvali sono ampiamente utilizzati nelle neuroscienze e offrono un'opportunità unica per monitorare l'attività dell'intero cervello alla risoluzione cellulare. Qui, forniamo un protocollo ottimizzato per l'esecuzione dell'imaging dell'intero cervello del pesce zebra larvale utilizzando la microscopia a fluorescenza tridimensionale, compresa la preparazione e l'immobilizzazione del campione, l'incorporamento del campione, l'acquisizione di immagini e la visualizzazione dopo l'imaging. L'attuale protocollo consente l'imaging in vivo della struttura e dell'attività neuronale di un cervello larvale di zebrafish a una risoluzione cellulare per oltre 1 ora utilizzando la microscopia confocale e la microscopia a fluorescenza progettata su misura. Vengono anche discussi i passaggi critici del protocollo, tra cui il montaggio e il posizionamento del campione, la prevenzione della formazione di bolle e polvere nel gel di agarosio e l'evitare il movimento nelle immagini causato dalla solidificazione incompleta del gel di agarosio e dalla paralisi del pesce. Il protocollo è stato convalidato e confermato in più impostazioni. Questo protocollo può essere facilmente adattato per l'imaging di altri organi di un pesce zebra larvale.