インビボ 3次元蛍光顕微鏡を用いたゼブラフィッシュ幼生の全脳イメージング

脊椎動物のモデル動物として、仔魚ゼブラフィッシュは神経科学で広く使用されており、細胞分解能で全脳活動を監視するユニークな機会を提供します。ここでは、サンプルの調製と固定化、サンプルの埋め込み、画像の取得、イメージング後の視覚化など、3次元蛍光顕微鏡を使用してゼブラフィッシュ仔魚の全脳イメージングを行うための最適化されたプロトコルを提供します。現在のプロトコルは、共焦点顕微鏡とカスタム設計の蛍光顕微鏡を使用して、1時間以上にわたって細胞分解能でゼブラフィッシュ仔魚の脳の構造とニューロン活動の in vivo イメージングを可能にします。サンプルの取り付けと位置決め、アガロースゲル内の気泡形成とほこりの防止、アガロースゲルの不完全な固化と魚の麻痺によって引き起こされる画像の動きの回避など、プロトコルの重要なステップについても説明します。プロトコルは、複数の設定で検証および確認されています。このプロトコルは、ゼブラフィッシュの幼虫の他の器官を画像化するために容易に適合させることができる。