In vivo Helhjerneavbildning av sebrafisklarver ved hjelp av tredimensjonal fluorescensmikroskopi

Som et virveldyrmodelldyr er larvesebrafisk mye brukt i nevrovitenskap og gir en unik mulighet til å overvåke helhjerneaktivitet ved cellulær oppløsning. Her gir vi en optimalisert protokoll for å utføre helhjerneavbildning av sebrafisk ved hjelp av tredimensjonal fluorescensmikroskopi, inkludert prøvepreparering og immobilisering, prøveinnbygging, bildeinnsamling og visualisering etter avbildning. Den nåværende protokollen muliggjør in vivo-avbildning av strukturen og nevronaktiviteten til en larvesebrafiskhjerne ved en cellulær oppløsning i over 1 time ved bruk av konfokalmikroskopi og spesialdesignet fluorescensmikroskopi. De kritiske trinnene i protokollen diskuteres også, inkludert prøvemontering og posisjonering, forebygging av bobledannelse og støv i agarosegelen, og unngå bevegelse i bilder forårsaket av ufullstendig størkning av agarosegelen og lammelse av fisken. Protokollen er validert og bekreftet i flere innstillinger. Denne protokollen kan enkelt tilpasses for avbildning av andre organer av en larvesebrafisk.