In vivo Imagem do cérebro inteiro de larvas de peixe-zebra usando microscopia de fluorescência tridimensional

Como um animal modelo de vertebrado, larvas de peixes-zebra são amplamente utilizadas em neurociência e fornecem uma oportunidade única para monitorar a atividade do cérebro inteiro na resolução celular. Aqui, fornecemos um protocolo otimizado para a realização de imagens de cérebro inteiro de larvas de peixe-zebra usando microscopia de fluorescência tridimensional, incluindo preparação e imobilização de amostras, incorporação de amostras, aquisição de imagens e visualização após exames de imagem. O protocolo atual permite imagens in vivo da estrutura e atividade neuronal de um cérebro de larvas de peixe-zebra em uma resolução celular por mais de 1 h usando microscopia confocal e microscopia de fluorescência personalizada. As etapas críticas do protocolo também são discutidas, incluindo a montagem e o posicionamento da amostra, evitando a formação de bolhas e poeira no gel de agarose, e evitando o movimento nas imagens causado pela solidificação incompleta do gel de agarose e paralisação dos peixes. O protocolo foi validado e confirmado em várias configurações. Este protocolo pode ser facilmente adaptado para obtenção de imagens de outros órgãos de uma larva de peixe-zebra.