В естественных условиях Визуализация всего мозга личинок рыбок данио-рерио с использованием трехмерной флуоресцентной микроскопии

В качестве модельного животного позвоночных личинки рыбок данио-рерио широко используются в нейробиологии и предоставляют уникальную возможность контролировать активность всего мозга при клеточном разрешении. Здесь мы предлагаем оптимизированный протокол для выполнения визуализации всего мозга личинок рыбок данио-рерио с использованием трехмерной флуоресцентной микроскопии, включая подготовку и иммобилизацию образцов, встраивание образцов, получение изображений и визуализацию после визуализации. Текущий протокол позволяет in vivo визуализировать структуру и активность нейронов мозга личинок рыбок данио-рерио с клеточным разрешением в течение более 1 часа с использованием конфокальной микроскопии и специально разработанной флуоресцентной микроскопии. Также обсуждаются критические шаги в протоколе, включая установку и позиционирование образца, предотвращение образования пузырьков и пыли в агарозном геле, а также предотвращение движения на изображениях, вызванного неполным затвердеванием агарозного геля и параличом рыбы. Протокол был проверен и подтвержден в нескольких настройках. Этот протокол может быть легко адаптирован для визуализации других органов личинок рыбок данио.