In vivo Helhjärnavbildning av zebrafisklarver med hjälp av tredimensionell fluorescensmikroskopi

Som ett ryggradsdjur modelldjur används larvzebrafisk i stor utsträckning inom neurovetenskap och ger en unik möjlighet att övervaka hela hjärnaktiviteten vid cellulär upplösning. Här tillhandahåller vi ett optimerat protokoll för att utföra helhjärnavbildning av larvzebrafiskar med hjälp av tredimensionell fluorescensmikroskopi, inklusive provberedning och immobilisering, provinbäddning, bildförvärv och visualisering efter avbildning. Det nuvarande protokollet möjliggör in vivo-avbildning av strukturen och neuronaktiviteten hos en larval zebrafiskhjärna med en cellulär upplösning i över 1 timme med hjälp av konfokalmikroskopi och specialdesignad fluorescensmikroskopi. De kritiska stegen i protokollet diskuteras också, inklusive provmontering och positionering, förhindrande av bubbelbildning och damm i agarosgelen och undvikande av rörelse i bilder orsakade av ofullständig stelning av agarosgelen och förlamning av fisken. Protokollet har validerats och bekräftats i flera inställningar. Detta protokoll kan enkelt anpassas för avbildning av andra organ av en larval zebrafisk.