3D-dyrkning af organoider fra murinale krypter og en enkelt stamcelle til organoidforskning

På nuværende tidspunkt udgør organoidkultur et vigtigt redskab til in vitro-undersøgelser af forskellige biologiske aspekter og sygdomme i forskellige organer. Murin tyndtarmkrypter kan danne organoider, der efterligner tarmepitelet, når de dyrkes i en 3D ekstracellulær matrix. Organoiderne er sammensat af alle celletyper, der opfylder forskellige intestinale homeostatiske funktioner. Disse omfatter Paneth-celler, enteroendokrine celler, enterocytter, bægerceller og tuftceller. Velkarakteriserede molekyler tilsættes i kulturmediet for at berige tarmstamcellerne (ISC'er) mærket med leucinrige gentagelser indeholdende G-proteinkoblet receptor 5 og bruges til at drive differentiering ned ad specifikke slægter; disse molekyler omfatter epidermal vækstfaktor, Noggin (et knoglemorfogenetisk protein) og R-spondin 1. Derudover er en protokol til generering af organoider fra en enkelt erythropoietinproducerende hepatocellulær receptor B2 (EphB2)-positiv ISC også detaljeret. I denne metodeartikel beskrives teknikker til isolering af tyndtarmskrypter og en enkelt ISC fra væv og sikring af effektiv etablering af organoider.