Abstract
Biology
Op dit moment is organoïdecultuur een belangrijk hulpmiddel voor in vitro studies van verschillende biologische aspecten en ziekten in verschillende organen. Murine dunne darmcrypten kunnen organoïden vormen die het darmepitheel nabootsen wanneer ze worden gekweekt in een 3D extracellulaire matrix. De organoïden zijn samengesteld uit alle celtypen die verschillende intestinale homeostatische functies vervullen. Deze omvatten Paneth-cellen, entero-endocriene cellen, enterocyten, bokaalcellen en plukjescellen. Goed gekarakteriseerde moleculen worden toegevoegd aan het kweekmedium om de intestinale stamcellen (ISC's) te verrijken, gelabeld met leucinerijke herhalingen die G-eiwit-gekoppelde receptor 5 bevatten en worden gebruikt om differentiatie naar specifieke afstammingslijnen te drijven; deze moleculen omvatten epidermale groeifactor, Noggin (een botmorfogenetisch eiwit) en R-spondin 1. Bovendien wordt ook een protocol beschreven om organoïden te genereren uit een enkele erytropoëtine-producerende hepatocellulaire receptor B2 (EphB2)-positieve ISC. In dit artikel worden technieken beschreven om dunne darmcrypten en een enkele ISC uit weefsels te isoleren en de efficiënte vestiging van organoïden te garanderen.
Explore More Videos
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved