La culture 3D d’organoïdes à partir de cryptes intestinales murines et d’une seule cellule souche pour la recherche organoïde

À l’heure actuelle, la culture organoïde représente un outil important pour les études in vitro de différents aspects biologiques et maladies dans différents organes. Les cryptes de l’intestin grêle murin peuvent former des organoïdes qui imitent l’épithélium intestinal lorsqu’ils sont cultivés dans une matrice extracellulaire 3D. Les organoïdes sont composés de tous les types de cellules qui remplissent diverses fonctions homéostatiques intestinales. Ceux-ci comprennent les cellules de Paneth, les cellules entéroendocrines, les entérocytes, les cellules caliciformes et les cellules de touffe. Des molécules bien caractérisées sont ajoutées dans le milieu de culture pour enrichir les cellules souches intestinales (CSI) marquées avec des répétitions riches en leucine contenant le récepteur 5 couplé à la protéine G et sont utilisées pour conduire la différenciation vers le bas de lignées spécifiques; ces molécules comprennent le facteur de croissance épidermique, Noggin (une protéine morphogénétique osseuse) et la R-spondine 1. De plus, un protocole pour générer des organoïdes à partir d’un seul ISC positif au récepteur hépatocellulaire B2 (EphB2) producteur d’érythropoïétine est également détaillé. Dans cet article sur les méthodes, des techniques permettant d’isoler les cryptes de l’intestin grêle et un seul ISC des tissus et d’assurer l’établissement efficace des organoïdes sont décrites.