Die 3D-Kultivierung von Organoiden aus murinen Darmkrypten und einer einzelnen Stammzelle für die Organoidforschung

Gegenwärtig stellt die Organoidkultur ein wichtiges Werkzeug für In-vitro-Studien verschiedener biologischer Aspekte und Erkrankungen in verschiedenen Organen dar. Mause Dünndarmkrypten können Organoide bilden, die das Darmepithel nachahmen, wenn sie in einer extrazellulären 3D-Matrix kultiviert werden. Die Organoide setzen sich aus allen Zelltypen zusammen, die verschiedene homöostatische Funktionen im Darm erfüllen. Dazu gehören Paneth-Zellen, enteroendokrine Zellen, Enterozyten, Becherzellen und Büschelzellen. Gut charakterisierte Moleküle werden dem Nährmedium zugesetzt, um die intestinalen Stammzellen (ISCs) anzureichern, die mit Leucin-reichen Wiederholungen markiert sind, die den G-Protein-gekoppelten Rezeptor 5 enthalten, und werden verwendet, um die Differenzierung entlang spezifischer Linien voranzutreiben. Zu diesen Molekülen gehören der epidermale Wachstumsfaktor, Noggin (ein knochenmorphogenetisches Protein) und R-Spondin 1. Darüber hinaus wird ein Protokoll zur Generierung von Organoiden aus einem einzelnen Erythropoietin-produzierenden hepatozellulären Rezeptor B2 (EphB2)-positiven ISC detailliert beschrieben. In diesem Methodenartikel werden Techniken beschrieben, um Dünndarmkrypten und einen einzelnen ISC aus Geweben zu isolieren und die effiziente Etablierung von Organoiden zu gewährleisten.