La coltura 3D di organoidi da cripte intestinali murine e una singola cellula staminale per la ricerca sugli organoidi

Attualmente, la coltura organoide rappresenta uno strumento importante per studi in vitro di diversi aspetti biologici e malattie in diversi organi. Le piccole cripte intestinali murine possono formare organoidi che imitano l'epitelio intestinale quando coltivate in una matrice extracellulare 3D. Gli organoidi sono composti da tutti i tipi di cellule che svolgono varie funzioni omeostatiche intestinali. Questi includono cellule di Paneth, cellule enteroendocrine, enterociti, cellule caliciformi e cellule ciuffo. Molecole ben caratterizzate vengono aggiunte nel terreno di coltura per arricchire le cellule staminali intestinali (ISC) marcate con ripetizioni ricche di leucina contenenti il recettore 5 accoppiato alla proteina G e vengono utilizzate per guidare la differenziazione verso il basso linee specifiche; queste molecole includono il fattore di crescita epidermico, Noggin (una proteina morfogenetica ossea) e R-spondina 1. Inoltre, è anche dettagliato un protocollo per generare organoidi da un singolo ISC positivo al recettore epatocellulare B2 (EphB2) produttore di eritropoietina. In questo articolo sui metodi sono descritte le tecniche per isolare le piccole cripte intestinali e un singolo ISC dai tessuti e garantire l'efficiente creazione di organoidi.