3D-dyrking av organoider fra murintestinale krypter og en enkelt stamcelle for organoidforskning

I dag representerer organoiddyrkning et viktig verktøy for in vitro-studier av ulike biologiske aspekter og sykdommer i ulike organer. Murine små tarmkrypter kan danne organoider som etterligner tarmepitelet når de dyrkes i en 3D ekstracellulær matrise. Organoidene er sammensatt av alle celletyper som oppfyller ulike intestinale homeostatiske funksjoner. Disse inkluderer Paneth-celler, enteroendokrine celler, enterocytter, bobleceller og tuftceller. Velkarakteriserte molekyler tilsettes i kulturmediet for å berike tarmstamceller (ISC) merket med leucinrike repetisjoner som inneholder G-proteinkoblet reseptor 5 og brukes til å drive differensiering ned spesifikke linjer; disse molekylene inkluderer epidermal vekstfaktor, Noggin (et benmorfogenetisk protein) og R-spondin 1. I tillegg er en protokoll for å generere organoider fra en enkelt erytropoietinproduserende hepatocellulær reseptor B2 (EphB2) -positiv ISC også detaljert. I denne metodeartikkelen beskrives teknikker for å isolere små tarmkrypter og en enkelt ISC fra vev og sikre effektiv etablering av organoider.