A Cultura 3D de Organoides de Criptas Intestinais Murinas e uma Única Célula-Tronco para Pesquisa de Organoides

Atualmente, a cultura de organoides representa uma importante ferramenta para estudos in vitro de diferentes aspectos biológicos e doenças em diferentes órgãos. As criptas murinas do intestino delgado podem formar organoides que mimetizam o epitélio intestinal quando cultivadas em uma matriz extracelular 3D. Os organoides são compostos por todos os tipos celulares que cumprem várias funções homeostáticas intestinais. Estes incluem células de Paneth, células enteroendócrinas, enterócitos, células caliciformes e células de tufo. Moléculas bem caracterizadas são adicionadas ao meio de cultura para enriquecer as células-tronco intestinais (ISCs) marcadas com repetições ricas em leucina contendo o receptor acoplado à proteína G 5 e são usadas para conduzir a diferenciação para linhagens específicas; essas moléculas incluem fator de crescimento epidérmico, Noggin (uma proteína morfogenética óssea) e R-espondina 1. Além disso, um protocolo para gerar organoides a partir de um único ISC positivo para receptor hepatocelular B2 (EphB2) produtor de eritropoetina também é detalhado. Neste artigo de métodos são descritas técnicas para isolar criptas do intestino delgado e um único ISC dos tecidos e garantir o estabelecimento eficiente de organoides.