3D-культивирование органоидов из крипт кишечника мышей и одной стволовой клетки для исследования органоидов

В настоящее время органоидная культура представляет собой важный инструмент для исследований in vitro различных биологических аспектов и заболеваний в различных органах. Мышиные тонкие кишечные крипты могут образовывать органоиды, которые имитируют кишечный эпителий при культивировании во внеклеточном 3D-матриксе. Органоиды состоят из всех типов клеток, которые выполняют различные гомеостатические функции кишечника. К ним относятся клетки Панета, энтероэндокринные клетки, энтероциты, бокаловидные клетки и пучковые клетки. Хорошо охарактеризованные молекулы добавляют в культуральную среду для обогащения кишечных стволовых клеток (МСК), меченных богатыми лейцином повторами, содержащими рецептор 5, связанный с G-белком, и используются для дифференцировки по определенным линиям; эти молекулы включают эпидермальный фактор роста, ноггин (костный морфогенетический белок) и R-спондин 1. Кроме того, подробно описан протокол генерации органоидов из одного гепатоцеллюлярного рецептора B2 (EphB2)-положительного ISC, продуцирующего эритропоэтин. В этой статье описаны методы выделения тонких кишечных крипт и одного ISC из тканей и обеспечения эффективного установления органоидов.