El cultivo 3D de organoides a partir de criptas intestinales murinas y una sola célula madre para la investigación de organoides

En la actualidad, el cultivo de organoides representa una herramienta importante para los estudios in vitro de diferentes aspectos biológicos y enfermedades en diferentes órganos. Las criptas murinas del intestino delgado pueden formar organoides que imitan el epitelio intestinal cuando se cultivan en una matriz extracelular 3D. Los organoides están compuestos por todos los tipos de células que cumplen diversas funciones homeostáticas intestinales. Estos incluyen células de Paneth, células enteroendocrinas, enterocitos, células caliciformes y células de penacho. Se agregan moléculas bien caracterizadas al medio de cultivo para enriquecer las células madre intestinales (ISC) marcadas con repeticiones ricas en leucina que contienen el receptor 5 acoplado a proteína G y se utilizan para impulsar la diferenciación en linajes específicos; estas moléculas incluyen el factor de crecimiento epidérmico, Noggin (una proteína morfogenética ósea) y R-spondin 1. Además, también se detalla un protocolo para generar organoides a partir de un único ISC positivo para el receptor hepatocelular B2 (EphB2) productor de eritropoyetina. En este artículo de métodos, se describen técnicas para aislar criptas del intestino delgado y un solo ISC de los tejidos y garantizar el establecimiento eficiente de organoides.