3D-odling av organoider från murina tarmkrypter och en enda stamcell för organoidforskning

Idag utgör organoidodling ett viktigt verktyg för in vitro-studier av olika biologiska aspekter och sjukdomar i olika organ. Murina tunntarmskrypter kan bilda organoider som efterliknar tarmepitelet när de odlas i en 3D extracellulär matris. Organoiderna består av alla celltyper som uppfyller olika intestinala homeostatiska funktioner. Dessa inkluderar Paneth-celler, enteroendokrina celler, enterocyter, bägarceller och tuftceller. Välkarakteriserade molekyler tillsätts i odlingsmediet för att berika tarmstamcellerna (ISC) märkta med leucinrika upprepningar innehållande G-proteinkopplad receptor 5 och används för att driva differentiering ner specifika linjer; dessa molekyler innefattar epidermal tillväxtfaktor, Noggin (ett benmorfogenetiskt protein) och R-spondin 1. Dessutom beskrivs också ett protokoll för att generera organoider från en enda erytropoietinproducerande hepatocellulär receptor B2 (EphB2)-positiv ISC. I denna metodartikel beskrivs tekniker för att isolera tunntarmskrypter och en enda ISC från vävnader och säkerställa effektiv etablering av organoider.