Murin Bağırsak Kriptlerinden Organoidlerin 3D Kültürlenmesi ve Organoid Araştırmaları için Tek Bir Kök Hücre

Günümüzde organoid kültür, farklı organlardaki farklı biyolojik yönlerin ve hastalıkların in vitro çalışmaları için önemli bir araçtır. Murin ince bağırsak kriptleri, 3D hücre dışı bir matriste kültürlendiğinde bağırsak epitelini taklit eden organoidler oluşturabilir. Organoidler, çeşitli bağırsak homeostatik fonksiyonlarını yerine getiren tüm hücre tiplerinden oluşur. Bunlar arasında Paneth hücreleri, enteroendokrin hücreler, enterositler, kadeh hücreleri ve tutam hücreleri bulunur. İyi karakterize edilmiş moleküller, G proteinine bağlı reseptör 5 içeren lösin bakımından zengin tekrarlarla etiketlenmiş bağırsak kök hücrelerini (ISC'ler) zenginleştirmek için kültür ortamına eklenir ve spesifik soylarda farklılaşmayı sağlamak için kullanılır; Bu moleküller epidermal büyüme faktörü, Noggin (bir kemik morfogenetik proteini) ve R-spondin 1'i içerir. Ek olarak, tek bir eritropoietin üreten hepatosellüler reseptör B2 (EphB2)-pozitif ISC'den organoidler üretmek için bir protokol de detaylandırılmıştır. Bu yöntem makalesinde, ince bağırsak kriptlerini ve tek bir ISC'yi dokulardan izole etme ve organoidlerin etkin bir şekilde kurulmasını sağlama teknikleri anlatılmaktadır.