Methanolbaseret helmonteret forberedelse til undersøgelse af retinale ganglionceller

Retinale ganglionceller (RGC'er), som er projektionsneuroner i nethinden, formerer ekstern visuel information til hjernen. Patologiske ændringer i RGC'er har et tæt forhold til adskillige retinale degenerative sygdomme. Helmonteret retinal immunfarvning anvendes ofte i eksperimentelle undersøgelser af RGC'er til evaluering af udviklingsmæssige og patologiske tilstande i nethinden. Under nogle omstændigheder kan det være nødvendigt at opbevare nogle værdifulde nethindeprøver, såsom dem fra transgene mus, i lang tid uden at påvirke morfologien eller antallet af RGC'er. For troværdige og reproducerbare eksperimentelle resultater er det vigtigt at bruge et effektivt konserveringsmedium. Her beskriver vi effekten af methanol som et ekstra fast medium til retinale helmonterede præparater og langtidsopbevaring. Kort sagt, under isolationsprocessen pipetteres kold methanol (-20 ° C) på overfladen af nethinden for at hjælpe med at fikse vævene og lette deres permeabilitet, og derefter kan nethinden opbevares i kold methanol (-20 ° C), før de bliver immunfarvede. Denne protokol beskriver retina-isolationsarbejdsgangen og vævsprøvelagringsprotokollen, som er nyttig og praktisk til undersøgelse af RGC'er.