Op methanol gebaseerd hele-mountpreparaat voor het onderzoek van retinale ganglioncellen

Retinale ganglioncellen (RGC's), de projectieneuronen van het netvlies, verspreiden externe visuele informatie naar de hersenen. Pathologische veranderingen in RGC's hebben een nauwe relatie met tal van retinale degeneratieve ziekten. Whole-mount retinale immunostaining wordt vaak gebruikt in experimentele studies op RGC's om de ontwikkelings- en pathologische omstandigheden van het netvlies te evalueren. Onder sommige omstandigheden moeten sommige waardevolle netvliesmonsters, zoals die van transgene muizen, mogelijk gedurende een lange periode worden bewaard zonder de morfologie of het aantal RGC's te beïnvloeden. Voor geloofwaardige en reproduceerbare experimentele resultaten is het gebruik van een effectief conserveringsmedium essentieel. Hier beschrijven we het effect van methanol als een hulpmedium voor retinale preparaten voor de gehele montage en langdurige opslag. Kortom, tijdens het isolatieproces wordt koude methanol (−20 °C) op het oppervlak van het netvlies gepipetteerd om de weefsels te helpen fixeren en hun permeabiliteit te vergemakkelijken, en vervolgens kunnen de netvliezen worden opgeslagen in koude methanol (−20 °C) voordat ze worden immunogekleurd. Dit protocol beschrijft de retina-isolatieworkflow en het protocol voor de opslag van weefselmonsters, wat nuttig en praktisch is voor het onderzoek van RGC's.