Цельный препарат на основе метанола для исследования ганглиозных клеток сетчатки

Ганглиозные клетки сетчатки (RGCs), которые являются проекционными нейронами сетчатки, распространяют внешнюю визуальную информацию в мозг. Патологические изменения в RGC имеют тесную связь с многочисленными дегенеративными заболеваниями сетчатки. Цельное иммуноокрашивание сетчатки часто используется в экспериментальных исследованиях RGC для оценки развития и патологических состояний сетчатки. При некоторых обстоятельствах некоторые ценные образцы сетчатки, например, от трансгенных мышей, может потребоваться хранить в течение длительного периода времени, не влияя на морфологию или количество RGC. Для получения достоверных и воспроизводимых экспериментальных результатов необходимо использовать эффективную консервирующую среду. Здесь мы описываем действие метанола как вспомогательной фиксированной среды для препаратов сетчатки и длительного хранения. Короче говоря, в процессе изоляции холодный метанол (-20 ° C) пипеткой наносится на поверхность сетчатки, чтобы помочь зафиксировать ткани и облегчить их проницаемость, а затем сетчатку можно хранить в холодном метаноле (-20 ° C) перед иммуноокрашиванием. Этот протокол описывает рабочий процесс выделения сетчатки и протокол хранения образцов тканей, что полезно и практично для исследования RGC.