A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
Органоиды опухолей произвели революцию в исследованиях рака и подходе к персонализированной медицине. Они представляют собой клинически значимую модель опухоли, которая позволяет исследователям оставаться на шаг впереди опухоли в клинике. Этот протокол устанавливает опухолевые органоиды из свежих образцов ткани опухоли поджелудочной железы и ксенотрансплантатов, полученных от пациента при аденокарциноме поджелудочной железы.
Опухолевые органоиды представляют собой трехмерные (3D) модели опухолей ex vivo , которые повторяют биологические ключевые особенности исходных первичных опухолевых тканей. Органоиды опухолей, полученные от пациентов, используются в трансляционных исследованиях рака и могут применяться для оценки чувствительности и резистентности к лечению, межклеточных взаимодействий и взаимодействий опухолевых клеток с микроокружением опухоли. Опухолевые органоиды представляют собой сложные системы культивирования, требующие передовых методов культивирования клеток и питательных сред со специфическими коктейлями факторов роста и биологической базальной мембраной, имитирующей внеклеточную среду. Возможность создания первичных опухолевых культур в значительной степени зависит от исходной ткани, клеточности и клинических особенностей опухоли, таких как степень опухоли. Кроме того, важнейшими элементами этой процедуры являются сбор образцов тканей, качество и количество материала, а также правильное биобанкирование и хранение. Технические возможности лаборатории также являются решающими факторами, которые следует учитывать. Здесь мы сообщаем о валидированной СОП/протоколе, который технически и экономически осуществим для культивирования опухолевых органоидов ex vivo из свежих образцов тканей происхождения из аденокарциномы поджелудочной железы, либо из свежей первичной резецированной донорской ткани пациента, либо из ксенотрансплантатов, полученных от пациента (PDX). Описанный здесь метод может быть выполнен в лабораториях с базовыми тканевыми культурами и оборудованием для мышей и адаптирован для широкого применения в области трансляционной онкологии.
Опухолевые органоиды представляют собой трехмерные (3D) организованные культуры ex vivo, полученные из свежей опухолевой ткани и обеспечивающие модели рака. Опухолевые органоиды повторяют биологические ключевые особенности исходной первичной опухоли 1,2,3,4 и могут быть расширены на срок до нескольких месяцев и криоконсервированы, подобно обычным иммортализированным клеточным линиям. Органоиды опухолей представляют собой биобанк моделей опухолей, полученных от пациентов, для трансляционной/персонализированной медицины
Все процедуры были проведены в соответствии с институциональными руководящими принципами по благополучию экспериментальных животных, утвержденными Комитетом по этике Автономного университета Мадрида (CEI 103-1958-A337) и La Comunidad de Madrid (PROEX 294/19), а также в соответствии с руководящими принципам.......
Важно задокументировать, как культивирование органоидов опухоли прогрессирует с течением времени, особенно в первые несколько недель, чтобы оценить, как культура будет вести себя в последующих анализах. На рисунке 2 показан пример оптимального выделения опухолевых кл?.......
Значительные достижения в фармакологической терапии рака являются сложной задачей, поскольку вероятность одобрения лекарств в клинических исследованиях I фазы онкологии составляет 5,1%, что является самым низким показателем среди всех типов заболевания23. Основная причин?.......
Это исследование было поддержано финансированием Plataforma biobancos y biomodelos - Unidades de las Plataformas ISCIII de apoyo ala I+D+i en Biomedicina y Ciencias de la Salud (PT20/00045), Программы исследований и инноваций Европейского Союза «Горизонт 2020» в рамках грантового соглашения No 857381, проект VISION (Стратегии укрепления научного превосходства и инновационного потенциала для ранней диагностики рака желудочно-кишечного тракта), Очный конкурс на новые исследовательские проекты для клинических исследователей и новых исследовательских групп IRYCIS (2021/0446), Проект органоидов, полученных из пациентов 2.0 (CIBERONC) и проект TRANSCAN II JTC 2017 «Создани....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
6 well Costar Ultra-low Attachment plates | Biofil | TCP011006 | |
70 μm pore strainer | VWR | 732-2758 | |
Ammonium Chloride Potassium (ACK) Lysis Buffer | Gibco | A10492-01 | |
Amphotericin B | Gibco | 15290018 | |
Cell culture incubator (21% O2, 5% CO2 and 37 ºC) | Nuaire | NU-4750E | |
Cell recovery solution | Corning | 354253 | |
Collagenase IV | Gibco | 17104019 | |
DMEM/F-12 (1:1)(1X) with L-Glutamine and HEPES | Gibco | 31330-038 | |
DNase | Roche | 10104159001 | |
Fetal Bovine Serum (FBS) | Corning | 35-079-CV | |
Freezing container, Nalgene | Merck | C1562 | |
gentleMACS Octo Dissociator | Milteny Biotec | 130-096-427 | |
HEPES | Gibco | 15630056 | |
Human Placenta Growth Factor (PlGF) | enQuireBio | QP6485-EC-100UG | |
Immunocompromised female 6-week-old NU-Foxn1nu nude mice | Janvier, France | ||
Insulin-like growth factor-1 (IGF-1) | Invitrogen | RP10931 | |
L-Glutamine | Corning | 354235 | |
Matrigel Basement Membrane Matrix | Corning | 356234 | |
Normocin | InvivoGen | ant-nr-2 | |
Pasteur pipettes | Deltalab | 200007 | |
Penicillin Streptomycin Solution (100x) | Corning | 30-002-CI | |
Phosphate-Buffered Saline (PBS) | Corning | 21-040-CV | |
Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF) | Gibco | PHG0026 | |
Recombinant Human Epidermal Growth Factor (EGF) | Gibco | PHG0311 | |
ROCK Inhibitor Y-27632 (Dihydrochloride) | STEMCELL | 72304 | |
StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent | Gibco | A1110501 | |
Surgical Blades | Nahita | FMB018 | |
Trypsin | Gibco | 25300054 |
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved