Получение опухолевых органоидов и фибробластов рака поджелудочной железы из свежих тканей

Summary

Органоиды опухолей произвели революцию в исследованиях рака и подходе к персонализированной медицине. Они представляют собой клинически значимую модель опухоли, которая позволяет исследователям оставаться на шаг впереди опухоли в клинике. Этот протокол устанавливает опухолевые органоиды из свежих образцов ткани опухоли поджелудочной железы и ксенотрансплантатов, полученных от пациента при аденокарциноме поджелудочной железы.

Abstract

Опухолевые органоиды представляют собой трехмерные (3D) модели опухолей ex vivo , которые повторяют биологические ключевые особенности исходных первичных опухолевых тканей. Органоиды опухолей, полученные от пациентов, используются в трансляционных исследованиях рака и могут применяться для оценки чувствительности и резистентности к лечению, межклеточных взаимодействий и взаимодействий опухолевых клеток с микроокружением опухоли. Опухолевые органоиды представляют собой сложные системы культивирования, требующие передовых методов культивирования клеток и питательных сред со специфическими коктейлями факторов роста и биологической базальной мембраной, имитирующей внеклеточную среду. Возможность создания первичных опухолевых культур в значительной степени зависит от исходной ткани, клеточности и клинических особенностей опухоли, таких как степень опухоли. Кроме того, важнейшими элементами этой процедуры являются сбор образцов тканей, качество и количество материала, а также правильное биобанкирование и хранение. Технические возможности лаборатории также являются решающими факторами, которые следует учитывать. Здесь мы сообщаем о валидированной СОП/протоколе, который технически и экономически осуществим для культивирования опухолевых органоидов ex vivo из свежих образцов тканей происхождения из аденокарциномы поджелудочной железы, либо из свежей первичной резецированной донорской ткани пациента, либо из ксенотрансплантатов, полученных от пациента (PDX). Описанный здесь метод может быть выполнен в лабораториях с базовыми тканевыми культурами и оборудованием для мышей и адаптирован для широкого применения в области трансляционной онкологии.

Introduction

Опухолевые органоиды представляют собой трехмерные (3D) организованные культуры ex vivo, полученные из свежей опухолевой ткани и обеспечивающие модели рака. Опухолевые органоиды повторяют биологические ключевые особенности исходной первичной опухоли 1,2,3,4 и могут быть расширены на срок до нескольких месяцев и криоконсервированы^, подобно обычным иммортализированным клеточным линиям. Органоиды опухолей представляют собой биобанк моделей опухолей, полученных от пациентов, для трансляционной/персонализированной медицины

Protocol

Все процедуры были проведены в соответствии с институциональными руководящими принципами по благополучию экспериментальных животных, утвержденными Комитетом по этике Автономного университета Мадрида (CEI 103-1958-A337) и La Comunidad de Madrid (PROEX 294/19), а также в соответствии с руководящими принципам.......

Discussion

Значительные достижения в фармакологической терапии рака являются сложной задачей, поскольку вероятность одобрения лекарств в клинических исследованиях I фазы онкологии составляет 5,1%, что является самым низким показателем среди всех типов заболевания²³. Основная причин?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
6 well Costar Ultra-low Attachment plates	Biofil	TCP011006
70 μm pore strainer	VWR	732-2758
Ammonium Chloride Potassium (ACK) Lysis Buffer	Gibco	A10492-01
Amphotericin B	Gibco	15290018
Cell culture incubator (21% O2, 5% CO2 and 37 ºC)	Nuaire	NU-4750E
Cell recovery solution	Corning	354253
Collagenase IV	Gibco	17104019
DMEM/F-12 (1:1)(1X) with L-Glutamine and HEPES	Gibco	31330-038
DNase	Roche	10104159001
Fetal Bovine Serum (FBS)	Corning	35-079-CV
Freezing container, Nalgene	Merck	C1562
gentleMACS Octo Dissociator	Milteny Biotec	130-096-427
HEPES	Gibco	15630056
Human Placenta Growth Factor (PlGF)	enQuireBio	QP6485-EC-100UG
Immunocompromised female 6-week-old NU-Foxn1nu nude mice	Janvier, France
Insulin-like growth factor-1 (IGF-1)	Invitrogen	RP10931
L-Glutamine	Corning	354235
Matrigel Basement Membrane Matrix	Corning	356234
Normocin	InvivoGen	ant-nr-2
Pasteur pipettes	Deltalab	200007
Penicillin Streptomycin Solution (100x)	Corning	30-002-CI
Phosphate-Buffered Saline (PBS)	Corning	21-040-CV
Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF)	Gibco	PHG0026
Recombinant Human Epidermal Growth Factor (EGF)	Gibco	PHG0311
ROCK Inhibitor Y-27632 (Dihydrochloride)	STEMCELL	72304
StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent	Gibco	A1110501
Surgical Blades	Nahita	FMB018
Trypsin	Gibco	25300054