Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Органоиды опухолей произвели революцию в исследованиях рака и подходе к персонализированной медицине. Они представляют собой клинически значимую модель опухоли, которая позволяет исследователям оставаться на шаг впереди опухоли в клинике. Этот протокол устанавливает опухолевые органоиды из свежих образцов ткани опухоли поджелудочной железы и ксенотрансплантатов, полученных от пациента при аденокарциноме поджелудочной железы.

Abstract

Опухолевые органоиды представляют собой трехмерные (3D) модели опухолей ex vivo , которые повторяют биологические ключевые особенности исходных первичных опухолевых тканей. Органоиды опухолей, полученные от пациентов, используются в трансляционных исследованиях рака и могут применяться для оценки чувствительности и резистентности к лечению, межклеточных взаимодействий и взаимодействий опухолевых клеток с микроокружением опухоли. Опухолевые органоиды представляют собой сложные системы культивирования, требующие передовых методов культивирования клеток и питательных сред со специфическими коктейлями факторов роста и биологической базальной мембраной, имитирующей внеклеточную среду. Возможность создания первичных опухолевых культур в значительной степени зависит от исходной ткани, клеточности и клинических особенностей опухоли, таких как степень опухоли. Кроме того, важнейшими элементами этой процедуры являются сбор образцов тканей, качество и количество материала, а также правильное биобанкирование и хранение. Технические возможности лаборатории также являются решающими факторами, которые следует учитывать. Здесь мы сообщаем о валидированной СОП/протоколе, который технически и экономически осуществим для культивирования опухолевых органоидов ex vivo из свежих образцов тканей происхождения из аденокарциномы поджелудочной железы, либо из свежей первичной резецированной донорской ткани пациента, либо из ксенотрансплантатов, полученных от пациента (PDX). Описанный здесь метод может быть выполнен в лабораториях с базовыми тканевыми культурами и оборудованием для мышей и адаптирован для широкого применения в области трансляционной онкологии.

Introduction

Опухолевые органоиды представляют собой трехмерные (3D) организованные культуры ex vivo, полученные из свежей опухолевой ткани и обеспечивающие модели рака. Опухолевые органоиды повторяют биологические ключевые особенности исходной первичной опухоли 1,2,3,4 и могут быть расширены на срок до нескольких месяцев и криоконсервированы, подобно обычным иммортализированным клеточным линиям. Органоиды опухолей представляют собой биобанк моделей опухолей, полученных от пациентов, для трансляционной/персонализированной медицины

Protocol

Все процедуры были проведены в соответствии с институциональными руководящими принципами по благополучию экспериментальных животных, утвержденными Комитетом по этике Автономного университета Мадрида (CEI 103-1958-A337) и La Comunidad de Madrid (PROEX 294/19), а также в соответствии с руководящими принципам.......

Representative Results

Важно задокументировать, как культивирование органоидов опухоли прогрессирует с течением времени, особенно в первые несколько недель, чтобы оценить, как культура будет вести себя в последующих анализах. На рисунке 2 показан пример оптимального выделения опухолевых кл?.......

Discussion

Значительные достижения в фармакологической терапии рака являются сложной задачей, поскольку вероятность одобрения лекарств в клинических исследованиях I фазы онкологии составляет 5,1%, что является самым низким показателем среди всех типов заболевания23. Основная причин?.......

Acknowledgements

Это исследование было поддержано финансированием Plataforma biobancos y biomodelos - Unidades de las Plataformas ISCIII de apoyo ala I+D+i en Biomedicina y Ciencias de la Salud (PT20/00045), Программы исследований и инноваций Европейского Союза «Горизонт 2020» в рамках грантового соглашения No 857381, проект VISION (Стратегии укрепления научного превосходства и инновационного потенциала для ранней диагностики рака желудочно-кишечного тракта), Очный конкурс на новые исследовательские проекты для клинических исследователей и новых исследовательских групп IRYCIS (2021/0446), Проект органоидов, полученных из пациентов 2.0 (CIBERONC) и проект TRANSCAN II JTC 2017 «Создани....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
6 well Costar Ultra-low Attachment platesBiofilTCP011006
70 μm pore strainerVWR732-2758
Ammonium Chloride Potassium (ACK) Lysis BufferGibcoA10492-01
Amphotericin BGibco15290018
Cell culture incubator (21% O2, 5% CO2 and 37 ºC)NuaireNU-4750E
Cell recovery solutionCorning 354253
Collagenase IVGibco17104019
DMEM/F-12 (1:1)(1X) with L-Glutamine and HEPESGibco31330-038
DNaseRoche10104159001
Fetal Bovine Serum (FBS)Corning35-079-CV
Freezing container, NalgeneMerckC1562
gentleMACS Octo DissociatorMilteny Biotec130-096-427
HEPESGibco15630056
Human Placenta Growth Factor (PlGF)enQuireBioQP6485-EC-100UG
Immunocompromised female 6-week-old NU-Foxn1nu nude miceJanvier, France 
Insulin-like growth factor-1 (IGF-1)InvitrogenRP10931
L-GlutamineCorning354235
Matrigel Basement Membrane Matrix Corning356234
NormocinInvivoGenant-nr-2
Pasteur pipettesDeltalab200007
Penicillin Streptomycin Solution (100x)Corning30-002-CI
Phosphate-Buffered Saline (PBS)Corning21-040-CV
Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF)GibcoPHG0026
Recombinant Human Epidermal Growth Factor (EGF)GibcoPHG0311
ROCK Inhibitor Y-27632 (Dihydrochloride)STEMCELL72304
StemPro Accutase Cell Dissociation ReagentGibcoA1110501
Surgical BladesNahitaFMB018
TrypsinGibco25300054

References

Explore More Articles

195ex vivoPDX

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved