הערכת גודל טיפות שומנים ואיחוי בתאי כבד בקר

Summary

הפרוטוקול הנוכחי מתאר כיצד להשתמש בשמן אדום O כדי לצבוע טיפות שומנים (LDs), לחשב את הגודל והמספר של LDs במודל הפטוציטים שומניים המושרה על ידי חומצות שומן, ולהשתמש ב- BODIPY 493/503 כדי לצפות בתהליך של LDs קטנים המתמזגים ל- LDs גדולים על ידי הדמיה של תאים חיים.

Abstract

טיפות שומנים (LDs) הן אברונים הממלאים תפקיד חשוב בחילוף חומרים של שומנים ובאחסון שומנים נייטרלי בתאים. הם קשורים למגוון מחלות מטבוליות, כגון השמנת יתר, מחלת כבד שומני וסוכרת. בתאי כבד, הגדלים והמספרים של LDs הם סימנים למחלת כבד שומני. יתר על כן, תגובת העקה החמצונית, אוטופגיה של תאים ואפופטוזיס מלווים לעתים קרובות בשינויים בגדלים ובמספרים של LDs. כתוצאה מכך, הממדים והכמות של LDs הם הבסיס למחקר הנוכחי לגבי המנגנון של ביוגנזה של LD. כאן, בתאי כבד בקר המושרים על ידי חומצות שומן, אנו מתארים כיצד להשתמש בשמן אדום O כדי להכתים LDs ולחקור את הגדלים והמספרים של LDs. התפלגות הגודל של LDs מנותחת סטטיסטית. התהליך של התמזגות LDs קטנים לתוך LDs גדולים נצפה גם על ידי מערכת הדמיה של תאים חיים. העבודה הנוכחית מספקת דרך לצפות ישירות במגמת שינוי הגודל של LDs בתנאים פיזיולוגיים שונים.

Introduction

הצטברות טיפות שומנים (LD) בהפטוציטים היא המאפיין האופייני של מחלת כבד שומני לא אלכוהולי (NAFLD), אשר יכולה להתקדם לפיברוזיס בכבד וקרצינומה הפטוצלולרית. נמצא כי הביטוי המוקדם ביותר של מחלת כבד שומני הוא סטאטוזיס, המאופיין הצטברות LD בציטופלסמה של הפטוציטים¹. סטאטוזיס בכבד קשורה תמיד למספר מוגבר ו / או גודל מורחב של LDs². LDs נחשבים להיווצר מן הרשתית האנדופלסמית (ER), המורכבת טריגליצרידים (TG) כמו הליבה, והם מוקפים חלבונים ופוספוליפידים³. כאברונים תת-תאיים האחראים על אחסון TG, LDs מפגינים תכונות שונות לגבי גודלם, מספרם, הרכב השומנים, חלבונים ואינטראקציה עם אברונים אחרים, שכולם משפיעים על הומאוסטזיס ....

Protocol

כל הנהלים אושרו ובוצעו בהתאם לסטנדרטים האתיים של ועדת הטיפול בבעלי חיים של האוניברסיטה החקלאית של הנאן (מחוז הנאן, סין).

1. תרבית תאי הפטוציטים של בקר

1. הפשיר את תאי הפטוציטים העיקריים¹⁷ ואת הצנטריפוגה 400 x גרם במשך 4 דקות בטמפרטורת החדר.
   הערה: תא.......

Discussion

בהתאם למצבים פתולוגיים, LDs בכבד עוברים שינויים עצומים בגודל ובמספר. LDs נמצאים באופן נרחב בתאי הפטוציטים וממלאים תפקיד מפתח בבריאות הכבד ובמחלות¹⁸. הכמות והגודל של LDs הם הבסיס למחקר הנוכחי על הביוגנזה של LDs¹⁹. הגודל והמספר של LDs עבור תאים ורקמות משקפים את יכולתם לאחסן .......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.25% trypsin	Gibco	25200072	reagent
4% paraformaldehyde	Solarbio	P1110	reagent
BODIPY 493/503	invitrogen	2295015	reagent
Cedar oil	Solarbio	C7140	reagent
cell counting chamber			equipment
cell culture dish	Corning	353002	material
cell sens software	Olympus IX73		software
Centrifuge	Eppendorf		equipment
DMEM	HyClone	SH30022.01	reagent
Fetal Bovine Serum	Gibco	2492319	reagent
hematoxylin	DingGuo	AR0712	reagent
Image view			image analysis sodtware
linoleic acid	Solarbio	SL8520	reagent
Live Cell Station	Nikon A1 HD25		equipment
NIS-Elements	Nikon		software
oil red O	Solarbio	G1260	reagent
optical microscope	Olympus IX73		equipment
Penicillin & Streptomycin 100×	NCM Biotech	CLOOC5	reagent
Phosphate Buffered Saline	HyClone	SH30258.01	reagent
Pipette	Eppendorf		equipment
Sealing agent	Solarbio	S2150	reagent