Cuantificación basada en imágenes de alto rendimiento de la síntesis y distribución del ADN mitocondrial

La gran mayoría de los procesos celulares requieren un suministro continuo de energía, cuyo portador más común es la molécula de ATP. Las células eucariotas producen la mayor parte de su ATP en las mitocondrias por fosforilación oxidativa. Las mitocondrias son orgánulos únicos porque tienen su propio genoma que se replica y se transmite a la siguiente generación de células. En contraste con el genoma nuclear, hay múltiples copias del genoma mitocondrial en la célula. El estudio detallado de los mecanismos responsables de la replicación, reparación y mantenimiento del genoma mitocondrial es esencial para comprender el buen funcionamiento de las mitocondrias y las células enteras tanto en condiciones normales como de enfermedad. Aquí se presenta un método que permite la cuantificación de alto rendimiento de la síntesis y distribución de ADN mitocondrial (ADNmt) en células humanas cultivadas in vitro . Este enfoque se basa en la detección por inmunofluorescencia de moléculas de ADN sintetizadas activamente marcadas por la incorporación de 5-bromo-2'-desoxiuridina (BrdU) y la detección concurrente de todas las moléculas de ADNmt con anticuerpos antiADN. Además, las mitocondrias se visualizan con colorantes o anticuerpos específicos. El cultivo de células en un formato de múltiples pocillos y la utilización de un microscopio de fluorescencia automatizado facilitan el estudio de la dinámica del ADNmt y la morfología de las mitocondrias en una variedad de condiciones experimentales en un tiempo relativamente corto.