एक ही माउस रेटिना की कॉन्फोकल छवियों के साथ दृश्य-प्रकाश ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी फाइबरग्राम का संरेखण

Summary

वर्तमान प्रोटोकॉल विवो दृश्य-प्रकाश ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी फाइबरोग्राफी (वीआईएस-ओसीटीएफ) छवियों को एक ही माउस रेटिना के एक्स विवो कॉन्फोकल छवियों के साथ संरेखित करने के लिए चरणों को रेखांकित करता है ताकि विवो छवियों में देखे गए रेटिना गैंग्लियन सेल एक्सॉन बंडल आकृति विज्ञान को सत्यापित किया जा सके।

Abstract

हाल के वर्षों में, विवो रेटिना इमेजिंग में, जो जैविक प्रणालियों और प्रक्रियाओं के बारे में गैर-इनवेसिव, वास्तविक समय और अनुदैर्ध्य जानकारी प्रदान करता है, आंखों के रोगों में तंत्रिका क्षति का उद्देश्य मूल्यांकन प्राप्त करने के लिए तेजी से लागू किया गया है। एक ही रेटिना की एक्स विवो कॉन्फोकल इमेजिंग अक्सर विशेष रूप से पशु अनुसंधान में विवो निष्कर्षों को मान्य करने के लिए आवश्यक होती है। इस अध्ययन में, हमने विवो छवियों के साथ माउस रेटिना की एक पूर्व विवो कॉन्फोकल छवि को संरेखित करने के लिए एक विधि का प्रदर्शन किया। माउस रेटिना की विवो छवियों को प्राप्त करने के लिए दृश्य प्रकाश ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी फाइबरग्राफी (विस-ओसीटीएफ) नामक एक नई नैदानिक-तैयार इमेजिंग तकनीक लागू की गई थी। फिर हमने विवो विस-ओसीटीएफ छवियों को मान्य करने के लिए "गोल्ड स्टैंडर्ड" के रूप में एक ही रेटिना की कॉन्फोकल इमेजिंग का प्रदर्शन किया। यह अध्ययन न केवल आणविक और सेलुलर तंत्र की आगे की जांच को सक्षम बनाता है, बल्कि विवो में तंत्रिका क्षति के संवेदनशील और उद्देश्य मूल्यांकन के लिए एक नींव भी स्थापित करता है।

Introduction

रेटिना गैंग्लियन कोशिकाएं (आरजीसी) दृश्य सूचना प्रसंस्करण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती हैं, आंतरिक प्लेक्सीफॉर्म परत (आईपीएल) में अपने डेंड्राइटिक पेड़ों के माध्यम से सिनैप्टिक इनपुट प्राप्त करती हैं और रेटिना तंत्रिका फाइबर परत (आरएनएफएल) में अपने अक्षतंतु के माध्यम से मस्तिष्क को 1,2,3,4 तक जानकारी प्रसारित करती हैं। ग्लूकोमा जैसी रोगग्रस्त स्थितियों में, प्रारंभिक आरजीसी अपघटन के परिणामस्वरूप आरएनएफएल, गैंग्लियन सेल परत (जीसीएल), आईपीएल, और रोगियों और कृंतक^मॉडल 5,6,7,8,9 दोनों में ऑप्टिक तंत्र....

Protocol

सभी पशु प्रक्रियाओं को वर्जीनिया विश्वविद्यालय में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) से जानवरों के उपयोग पर दिशानिर्देश के अनुर?.......

Discussion

इस प्रोटोकॉल में दो चरण हैं जिन पर ध्यान देने की आवश्यकता है। सबसे पहले, यह सुनिश्चित करना आवश्यक है कि जानवर गहरे संज्ञाहरण के तहत है और ओसीटी इमेजिंग से पहले उनकी आंखें पूरी तरह से फैल गई हैं। यदि चूहो?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Equipment
Halo 100	Opticent Health, Evanston, IL
Zeiss LSM800 microscope	Carl Zeiss
Drugs and antibodies
4% paraformaldehyde (PFA)	Santz Cruz Biotechnology, SC-281692		1-2 drops
Bovine serum albumin powder	Fisher Scientific, BP9706-100		1:10
Donkey anti Mouse Alexa Fluor 488 dye	Thermo Fisher Scientific, Cat# A-21202		1:1,000
Donkey anti rat Alexa Fluor 594 dye	Thermo Fisher Scientific, Cat# A-21209		1:1,000
Euthasol (a mixture of pentobarbital sodium (390 mg/mL) and phenytoin sodium (50 mg/mL))	Covetrus, NDC 11695-4860-1		15.6 mg/mL
Ketamine	Covetrus, NADA043304		114 mg/kg
Mouse anti-Tuj1	A gift from Anthony J. Spano, University of Virginia		1:200
Normal donkey serum(NDS)	Millipore Sigma, S30-100 mL		1:100
Phosphate-buffered saline (PBS, 10x), pH 7.4 (Contains 1370 mM NaCl, 27 mM KCl, 80 mM Na2HPO4, and 20 mM KH2PO4)	Thermo Fisher Scientific, Cat# J62036.K3		1:10
Rat anti-ICAM-2	BD Pharmingen, Cat#553325		1:500
Tropicamide drops	Covetrus, NDC17478-102-12
Triton X-100 (Reagent Grade)	VWR, CAS: 9002-93-1		1:20
Vectashield mounting medium	Vector Laboratories Inc. H2000-10
Xylazine	Covetrus, NDC59399-110-20		17 mg/kg