تحسين نماذج ليبوفوسين والقياس الكمي لقدرة البلعمة في الجزء الخارجي في الثقافات الظهارية الصبغية للشبكية البشرية شديدة الاستقطاب

تساهم البلعمة اليومية للأجزاء الخارجية للمستقبلات الضوئية بواسطة ظهارة صبغة الشبكية (RPE) في تراكم صبغة الشيخوخة داخل الخلايا التي تسمى ليبوفوسين. سمية ليبوفوسين راسخة في مرض ستارغاردت ، وهو تنكس الشبكية الوراثي الأكثر شيوعا ، ولكنه أكثر إثارة للجدل في الضمور البقعي المرتبط بالعمر (AMD) ، وهو السبب الرئيسي للعمى الذي لا رجعة فيه في العالم المتقدم. كان تحديد سمية الليبوفوسين في البشر أمرا صعبا ، والنماذج الحيوانية ل Stargardt لها سمية محدودة. وبالتالي ، هناك حاجة إلى نماذج في المختبر تحاكي RPE البشري في الجسم الحي لفهم توليد الليبوفوسين وإزالته وسميته بشكل أفضل. كانت غالبية نماذج ليبوفوسين زراعة الخلايا حتى الآن في خطوط الخلايا أو تضمنت تغذية RPE بمكون واحد من خليط الليبوفوسين المعقد بدلا من شظايا / أطراف الجزء الخارجي للمستقبل الضوئي بأكمله ، مما يولد نموذجا أكثر اكتمالا وفسيولوجيا ليبوفوسين. الموصوف هنا هو طريقة للحث على تراكم المواد الشبيهة بالليبوفوسين (تسمى مادة التألق الذاتي غير القابلة للهضم ، أو UAM) في RPE البشري الأولي قبل الولادة (hfRPE) والخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات (iPSC) المشتقة من RPE. تراكمت UAM في الثقافات عن طريق التغذية المتكررة لشظايا OS المعالجة بالأشعة فوق البنفسجية التي تمتصها RPE عن طريق البلعمة. كما تمت مناقشة الطرق الرئيسية التي يقترب بها UAM ويختلف عن lipofuscin في الجسم الحي . يرافق هذا النموذج من التراكم الشبيه بالليبوفوسين ، يتم تقديم طرق التصوير لتمييز طيف التألق الذاتي الواسع لحبيبات UAM من تلطيخ الأجسام المضادة المتزامن. أخيرا ، لتقييم تأثير UAM على قدرة البلعمة RPE ، تم تقديم طريقة جديدة لتحديد كمية امتصاص الجزء الخارجي / الأطراف وتفكيكها. تتغلب هذه الطريقة ، التي يطلق عليها "السعة الاستهلاكية الكلية" ، على التفسيرات الخاطئة المحتملة لقدرة البلعمة RPE المتأصلة في فحوصات "مطاردة النبض" الكلاسيكية للجزء الخارجي. يمكن استخدام النماذج والتقنيات المقدمة هنا لدراسة توليد الليبوفوسين ومسارات الإزالة والسمية المفترضة.