अत्यधिक ध्रुवीकृत मानव रेटिना वर्णक उपकला संस्कृतियों में बेहतर लिपोफसिन मॉडल और बाहरी खंड फागोसाइटोसिस क्षमता का परिमाणीकरण

रेटिना वर्णक उपकला (आरपीई) द्वारा फोटोरिसेप्टर बाहरी खंडों का दैनिक फागोसाइटोसिस एक इंट्रासेल्युलर उम्र बढ़ने वाले वर्णक के संचय में योगदान देता है जिसे लिपोफसिन कहा जाता है। लिपोफस्सिन की विषाक्तता स्टार्गर्ड की बीमारी में अच्छी तरह से स्थापित है, सबसे आम विरासत में मिली रेटिना अपघटन, लेकिन उम्र से संबंधित मैकुलर अपघटन (एएमडी) में अधिक विवादास्पद है, जो विकसित दुनिया में अपरिवर्तनीय अंधापन का प्रमुख कारण है। मनुष्यों में लिपोफससिन विषाक्तता का निर्धारण करना मुश्किल रहा है, और स्टारगार्ड के पशु मॉडल में सीमित विषाक्तता है। इस प्रकार, इन विट्रो मॉडल जो विवो में मानव आरपीई की नकल करते हैं, लिपोफसिन उत्पादन, निकासी और विषाक्तता को बेहतर ढंग से समझने के लिए आवश्यक हैं। आज तक अधिकांश सेल कल्चर लिपोफसिन मॉडल सेल लाइनों में रहे हैं या आरपीई को पूरे फोटोरिसेप्टर बाहरी खंड के टुकड़ों / युक्तियों के बजाय जटिल लिपोफसिन मिश्रण के एक घटक को खिलाना शामिल है, जो एक अधिक पूर्ण और शारीरिक लिपोफसिन मॉडल उत्पन्न करता है। यहां वर्णित अत्यधिक विभेदित प्राथमिक मानव प्रसव पूर्व आरपीई (एचएफआरपीई) और प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल (आईपीएससी) व्युत्पन्न आरपीई में लिपोफसिन जैसी सामग्री (जिसे अपचनीय ऑटोफ्लोरेसेंस सामग्री, या यूएएम कहा जाता है) के संचय को प्रेरित करने की एक विधि है। फागोसाइटोसिस के माध्यम से आरपीई द्वारा उठाए गए पराबैंगनी प्रकाश-उपचारित ओएस टुकड़ों के बार-बार फीडिंग द्वारा संस्कृतियों में यूएएम जमा हुआ। विवो में लिपोफस्सिन से यूएएम अनुमानित और भिन्न होने के प्रमुख तरीकों पर भी चर्चा की गई है। लिपोफससिन जैसे संचय के इस मॉडल के साथ, समवर्ती एंटीबॉडी धुंधला होने से यूएएम ग्रैन्यूल के व्यापक ऑटोफ्लोरेसेंस स्पेक्ट्रम को अलग करने के लिए इमेजिंग विधियां पेश की जाती हैं। अंत में, आरपीई फागोसाइटोसिस क्षमता पर यूएएम के प्रभाव का आकलन करने के लिए, बाहरी खंड के टुकड़े / टिप्स अपटेक और ब्रेकडाउन को निर्धारित करने के लिए एक नई विधि पेश की गई है। "कुल उपभोग्य क्षमता" कहा जाता है, यह विधि क्लासिक बाहरी खंड "पल्स-चेज़" परख में निहित आरपीई फागोसाइटोसिस क्षमता की संभावित गलत व्याख्याओं को दूर करती है। यहां पेश किए गए मॉडल और तकनीकों का उपयोग लिपोफसिन उत्पादन और निकासी मार्गों और कथित विषाक्तता का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है।