बेहतर प्रोटीन खोज और परिमाणीकरण के लिए माइटोकॉन्ड्रिया का दो-चरण टैग-मुक्त अलगाव

अधिकांश शारीरिक और रोग प्रक्रियाएं, केंद्रीय चयापचय से लेकर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया से लेकर न्यूरोडीजेनेरेशन तक, माइटोकॉन्ड्रिया को शामिल करती हैं। माइटोकॉन्ड्रियल प्रोटिओम 1,000 से अधिक प्रोटीन से बना है, और प्रत्येक की बहुतायत बाहरी उत्तेजनाओं के जवाब में या रोग की प्रगति के दौरान गतिशील रूप से भिन्न हो सकती है। यहां, हम प्राथमिक कोशिकाओं और ऊतकों से उच्च गुणवत्ता वाले माइटोकॉन्ड्रिया को अलग करने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं। दो-चरणीय प्रक्रिया में (1) कच्चे माइटोकॉन्ड्रिया को अलग करने के लिए यांत्रिक समरूपीकरण और अंतर सेंट्रीफ्यूजेशन शामिल हैं, और (2) शुद्ध ऑर्गेनेल को अलग करने और दूषित पदार्थों को खत्म करने के लिए माइटोकॉन्ड्रिया का टैग-मुक्त प्रतिरक्षा कैप्चर शामिल है। प्रत्येक शुद्धि चरण से माइटोकॉन्ड्रियल प्रोटीन का मात्रात्मक मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा विश्लेषण किया जाता है, और संवर्धन पैदावार की गणना की जाती है, जिससे घटाव प्रोटिओमिक्स द्वारा नए माइटोकॉन्ड्रियल प्रोटीन की खोज की अनुमति मिलती है। हमारा प्रोटोकॉल सेल लाइनों, प्राथमिक कोशिकाओं और ऊतकों में माइटोकॉन्ड्रियल सामग्री का अध्ययन करने के लिए एक संवेदनशील और व्यापक दृष्टिकोण प्रदान करता है।