Montagem e Operação de um Estágio de Resfriamento para Imobilização de C. elegans em Suas Placas de Cultura

Abordagens de microscopia in vivo de alta resolução podem revelar informações sutis e detalhes finos dentro do animal modelo Caenorhabditis elegans (C. elegans), mas requerem forte imobilização animal para evitar borrões de movimento nas imagens. Infelizmente, a maioria das técnicas atuais de imobilização requer esforço manual substancial, tornando as imagens de alta resolução de baixo rendimento. A imobilização de C. elegans é muito simplificada usando uma abordagem de resfriamento que pode facilmente imobilizar populações inteiras diretamente em suas placas de cultivo. O estágio de resfriamento pode estabelecer e manter uma ampla faixa de temperaturas com uma distribuição uniforme na placa de cultivo. Neste artigo, todo o processo de construção da etapa de resfriamento está documentado. O objetivo é que um pesquisador típico possa construir uma etapa de resfriamento operacional em seu laboratório seguindo este protocolo sem dificuldade. A utilização da etapa de resfriamento seguindo três protocolos é mostrada, e cada protocolo apresenta vantagens para diferentes experimentos. Também é mostrado um exemplo de perfil de resfriamento do estágio à medida que se aproxima de sua temperatura final e algumas dicas úteis no uso da imobilização de resfriamento.