Assemblaggio e funzionamento di uno stadio di raffreddamento per immobilizzare C. elegans sulle loro piastre di coltura

Gli approcci di microscopia in vivo ad alta risoluzione possono rivelare informazioni sottili e dettagli fini all'interno dell'animale modello Caenorhabditis elegans (C. elegans), ma richiedono una forte immobilizzazione animale per prevenire la sfocatura del movimento nelle immagini. Sfortunatamente, la maggior parte delle attuali tecniche di immobilizzazione richiede un notevole sforzo manuale, rendendo l'imaging ad alta risoluzione a bassa produttività. L'immobilizzazione di C. elegans è notevolmente semplificata utilizzando un approccio di raffreddamento che può facilmente immobilizzare intere popolazioni direttamente sui loro piatti di coltivazione. La fase di raffreddamento può stabilire e mantenere un ampio intervallo di temperature con una distribuzione uniforme sulla piastra di coltivazione. In questo articolo, l'intero processo di costruzione della fase di raffreddamento è documentato. L'obiettivo è che un tipico ricercatore possa costruire una fase di raffreddamento operativa nel proprio laboratorio seguendo questo protocollo senza difficoltà. Viene mostrato l'utilizzo della fase di raffreddamento seguendo tre protocolli e ogni protocollo presenta vantaggi per diversi esperimenti. Viene inoltre mostrato un esempio di profilo di raffreddamento dello stadio mentre si avvicina alla sua temperatura finale e alcuni suggerimenti utili nell'utilizzo dell'immobilizzazione del raffreddamento.