Bioensaio de Hidratação Polínica In Vivo de Grão Único de Alta Resolução para Arabidopsis thaliana

A reprodução sexuada em plantas com flores requer interação inicial entre o grão de pólen e a superfície estigmatizada, onde um diálogo molecular é estabelecido entre os parceiros que interagem. Estudos em uma variedade de espécies revelaram que uma série de pontos de verificação moleculares regulam a interação pólen-estigma para garantir que apenas pólen compatível, geralmente intraespecífico, seja bem-sucedido na fertilização. Em espécies que possuem um "estigma seco", como a planta-modelo Arabidopsis thaliana, o primeiro ponto de verificação de compatibilidade pré-zigótica pós-polinização é o estabelecimento da hidratação polínica.

Esta fase da polinização é fortemente regulada, em que os sinais do grão de pólen provocam a liberação de água do estigma, permitindo assim a hidratação do pólen. A capacidade de medir e rastrear com precisão a hidratação do pólen ao longo do tempo é a chave para o planejamento de experimentos direcionados à compreensão da regulação dessa etapa crítica da reprodução. Os protocolos publicados frequentemente utilizam flores que foram excisadas da planta mãe, mantidas em meio líquido ou sólido e polinizadas em massa.

Este trabalho descreve um bioensaio de polinização in vivo não invasivo que permite o rastreamento minuto a minuto da hidratação de grãos de pólen individuais de A. thaliana em alta resolução. O ensaio é altamente reprodutível, capaz de detectar variações muito sutis dos perfis de hidratação polínica e, portanto, é adequado para a análise de mutantes que afetam as vias reguladoras da polinização. Embora o protocolo seja mais extenso do que os descritos para polinizações em massa, a precisão e a reprodutibilidade que ele proporciona, juntamente com sua natureza in vivo , o tornam ideal para a dissecção detalhada dos fenótipos de polinização.