En högupplöst, enkelkornig, in vivo pollenhydreringsbioassay för Arabidopsis thaliana

Sexuell reproduktion i blommande växter kräver initial interaktion mellan pollenkornet och den stigmatiska ytan, där en molekylär dialog upprättas mellan de interagerande partnerna. Studier över en rad arter har visat att en serie molekylära kontrollpunkter reglerar pollen-stigma-interaktionen för att säkerställa att endast kompatibel, i allmänhet intraspecifik pollen är framgångsrik för att åstadkomma befruktning. I arter som har en "torr stigma", såsom modellväxten Arabidopsis thaliana, är den första kontrollpunkten efter pollinering, prezygotisk kompatibilitetskontrollpunkt upprättandet av pollenhydrering.

Denna fas av pollinering är hårt reglerad, varigenom signaler från pollenkornet framkallar frisättning av vatten från stigmatiseringen, vilket möjliggör pollenhydrering. Förmågan att noggrant mäta och spåra pollenhydrering över tid är nyckeln till utformningen av experiment som syftar till att förstå regleringen av detta kritiska steg i reproduktionen. Publicerade protokoll använder ofta blommor som har skurits ut från moderplantan, upprätthållits på flytande eller fasta medier och bulkpollinerat.

Detta dokument beskriver en icke-invasiv, in vivo pollinering bioassay som möjliggör minut-för-minut hydreringsspårning av enskilda A. thaliana pollenkorn med hög upplösning. Analysen är mycket reproducerbar, kan detektera mycket subtila variationer av pollenhydratiseringsprofiler och är därför lämplig för analys av mutanter som påverkar vägar som reglerar pollinering. Även om protokollet är längre än de som beskrivs för bulkpollineringar, gör precisionen och reproducerbarheten det ger, tillsammans med dess in vivo-natur , det idealiskt för detaljerad dissektion av pollineringsfenotyper.