Arabidopsis thaliana için Yüksek Çözünürlüklü, Tek Taneli, In Vivo Polen Hidrasyon Biyotahlili

Çiçekli bitkilerde cinsel üreme, polen tanesi ile etkileşime giren ortaklar arasında moleküler bir diyaloğun kurulduğu stigmatik yüzey arasındaki ilk etkileşimi gerektirir. Bir dizi tür üzerinde yapılan çalışmalar, bir dizi moleküler kontrol noktasının, yalnızca uyumlu, genellikle intraspesifik polenlerin döllenmeyi etkilemede başarılı olmasını sağlamak için polen-damgalama etkileşimini düzenlediğini ortaya koymuştur. Arabidopsis thaliana model bitkisi gibi 'kuru damgalamaya' sahip türlerde, tozlaşma sonrası ilk prezigotik uyumluluk kontrol noktası polen hidrasyonunun kurulmasıdır.

Bu tozlaşma aşaması sıkı bir şekilde düzenlenir, böylece polen tanesinden gelen sinyaller damgalamadan suyun salınımını sağlar, böylece polen hidrasyonuna izin verir. Polen hidrasyonunu zaman içinde doğru bir şekilde ölçme ve izleme yeteneği, üremedeki bu kritik adımın düzenlenmesini anlamaya yönelik deneylerin tasarımının anahtarıdır. Yayınlanan protokoller sıklıkla ana bitkiden eksize edilmiş, sıvı veya katı ortamlarda tutulan ve toplu olarak tozlaşan çiçekleri kullanır.

Bu yazıda, bireysel A. thaliana polen tanelerinin yüksek çözünürlükte dakika dakika hidrasyon takibine izin veren invaziv olmayan, in vivo tozlaşma biyotahlili açıklanmaktadır. Tahlil oldukça tekrarlanabilir, polen hidrasyon profillerinin çok ince varyasyonlarını tespit edebilir ve bu nedenle tozlaşmayı düzenleyen yolları etkileyen mutantların analizi için uygundur. Protokol, toplu tozlaşmalar için tarif edilenlerden daha uzun olmasına rağmen, sağladığı hassasiyet ve tekrarlanabilirlik, in vivo doğası ile birlikte, tozlaşma fenotiplerinin ayrıntılı diseksiyonu için idealdir.