Abstract
Genetics
يسمح الوراثة اللاجينية عبر الأجيال (TEI) بنقل المعلومات عبر الخط الجرثومي دون تغيير تسلسل الجينوم ، من خلال عوامل مثل الحمض النووي الريبي غير المشفر وتعديلات الكروماتين. تعد ظاهرة وراثة تداخل الحمض النووي الريبي (RNAi) في الديدان الخيطية Caenorhabditis elegans نموذجا فعالا للتحقيق في TEI يستفيد من دورة الحياة القصيرة لهذا الكائن النموذجي ، والتكاثر الذاتي ، والشفافية. في وراثة RNAi ، يؤدي تعرض ل RNAi إلى إسكات الجينات وتغيير توقيعات الكروماتين في الموقع المستهدف والتي تستمر لأجيال متعددة في غياب الزناد الأولي. يصف هذا البروتوكول تحليل وراثة الحمض النووي الريبي في C. elegans باستخدام مراسل بروتين الفلورسنت الأخضر النووي المعبر عنه بالخط الجرثومي (GFP). يبدأ إسكات المراسل عن طريق إطعام البكتيريا التي تعبر عن الحمض النووي الريبي المزدوج الذي يستهدف GFP. في كل جيل ، يتم تمرير للحفاظ على التطور المتزامن ، ويتم تحديد إسكات الجينات المراسل عن طريق الفحص المجهري. في أجيال مختارة ، يتم جمع السكان ومعالجتهم من أجل الترسيب المناعي للكروماتين (ChIP) - تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي (qPCR) لقياس إثراء تعديل الهستون في موقع مراسل GFP. يمكن تعديل هذا البروتوكول لدراسة وراثة الحمض النووي الريبي بسهولة ودمجه مع تحليلات أخرى لمزيد من التحقيق في عوامل TEI في مسارات الحمض النووي الريبي والكروماتين الصغيرة.
Explore More Videos
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved