एक फ्लोरोसेंट रिपोर्टर और क्रोमैटिन इम्यूनोप्रेसिपेशन (सीएचआईपी) का उपयोग करके सी एलिगेंस में ट्रांसजेनरेशनल एपिजेनेटिक इनहेरिटेंस का विश्लेषण

ट्रांसजेनरेशनल एपिजेनेटिक इनहेरिटेंस (टीईआई) गैर-कोडिंग आरएनए और क्रोमैटिन संशोधनों जैसे कारकों के माध्यम से जीनोम अनुक्रम को बदले बिना जर्मलाइन के माध्यम से जानकारी के संचरण की अनुमति देता है। नेमाटोड केनोरहाब्डिस एलिगेंस में आरएनए हस्तक्षेप (आरएनएआई) वंशानुक्रम की घटना टीईआई की जांच करने के लिए एक प्रभावी मॉडल है जो इस मॉडल जीव के छोटे जीवन चक्र, आत्म-प्रसार और पारदर्शिता का लाभ उठाता है। आरएनएआई वंशानुक्रम में, आरएनएआई के लिए जानवरों के संपर्क में आने से लक्षित स्थान पर जीन साइलेंसिंग और परिवर्तित क्रोमैटिन हस्ताक्षर होते हैं जो प्रारंभिक ट्रिगर की अनुपस्थिति में कई पीढ़ियों तक बने रहते हैं। यह प्रोटोकॉल जर्मलाइन-व्यक्त परमाणु हरे फ्लोरोसेंट प्रोटीन (जीएफपी) रिपोर्टर का उपयोग करके सी एलिगेंस में आरएनएआई वंशानुक्रम के विश्लेषण का वर्णन करता है। जीएफपी को लक्षित करने वाले डबल-फंसे आरएनए को व्यक्त करने वाले जानवरों के बैक्टीरिया को खिलाकर रिपोर्टर साइलेंसिंग शुरू की जाती है। प्रत्येक पीढ़ी में, जानवरों को सिंक्रनाइज़ विकास को बनाए रखने के लिए पारित किया जाता है, और रिपोर्टर जीन साइलेंसिंग माइक्रोस्कोपी द्वारा निर्धारित किया जाता है। चुनिंदा पीढ़ियों में, आबादी को जीएफपी रिपोर्टर लोकस में हिस्टोन संशोधन संवर्धन को मापने के लिए क्रोमैटिन इम्यूनोप्रेसिपेशन (सीएचआईपी) -मात्रात्मक पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (क्यूपीसीआर) के लिए एकत्र और संसाधित किया जाता है। आरएनएआई वंशानुक्रम का अध्ययन करने के लिए इस प्रोटोकॉल को आसानी से संशोधित किया जा सकता है और छोटे आरएनए और क्रोमैटिन मार्गों में टीईआई कारकों की जांच करने के लिए अन्य विश्लेषणों के साथ जोड़ा जा सकता है।