Análise da Herança Epigenética Transgeracional em C. elegans Usando um Fluorescente Reporter e Imunoprecipitação de Cromatina (ChIP)

A herança epigenética transgeracional (TEI) permite a transmissão de informações através da linha germinativa sem alterar a sequência do genoma, através de fatores como RNAs não codificantes e modificações na cromatina. O fenômeno da herança de RNA de interferência (RNAi) no nematoide Caenorhabditis elegans é um modelo eficaz para investigar TEI que aproveita o curto ciclo de vida, autopropagação e transparência desse organismo modelo. Na herança de RNAi, a exposição dos animais ao RNAi leva ao silenciamento gênico e assinaturas alteradas de cromatina no locus alvo que persistem por várias gerações na ausência do gatilho inicial. Este protocolo descreve a análise da herança de RNAi em C. elegans usando um repórter de proteína fluorescente verde nuclear (GFP) expressa em linhagem germinativa. O silenciamento do repórter é iniciado alimentando os animais com bactérias que expressam RNA de fita dupla visando a GFP. A cada geração, os animais são passados para manter o desenvolvimento sincronizado, e o silenciamento gênico do repórter é determinado por microscopia. Em gerações selecionadas, populações são coletadas e processadas para imunoprecipitação de cromatina (ChIP)-reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) para medir o enriquecimento de modificação de histonas no locus repórter da GFP. Este protocolo para estudar a herança de RNAi pode ser facilmente modificado e combinado com outras análises para investigar fatores TEI em pequenas vias de RNA e cromatina.