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Genetics

基于荧光报告基因和染色质免疫沉淀法(ChIP)分析 秀丽隐杆线虫 的跨代表观遗传

Published: May 5th, 2023

DOI:

10.3791/65285

1Department of Cell and Systems Biology, University of Toronto

* These authors contributed equally

Abstract

跨代表观遗传 (TEI) 允许通过非编码 RNA 和染色质修饰等因素在不改变基因组序列的情况下通过种系传递信息。线虫秀 丽隐 杆线虫的RNA干扰(RNAi)遗传现象是研究TEI的有效模型,它利用了该模式生物的短生命周期、自我繁殖和透明度。在RNAi遗传中,动物暴露于RNAi会导致基因沉默和靶位点染色质特征的改变,在没有初始触发因素的情况下持续多代。该方案描述了使用种系表达的核绿色荧光蛋白(GFP)报告基因分析 秀丽隐杆线虫 中的RNAi遗传。报告基因沉默是通过给动物喂食表达靶向GFP的双链RNA的细菌来启动的。在每一代中,动物被传代以保持同步发育,并通过显微镜确定报告基因沉默。在选定的世代中,收集群体并对其进行染色质免疫沉淀 (ChIP)-定量聚合酶链反应 (qPCR) 处理,以测量 GFP 报告基因座的组蛋白修饰富集。这种用于研究RNAi遗传的方案可以很容易地修改并与其他分析相结合,以进一步研究小RNA和染色质途径中的TEI因子。

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