형광 리포터 및 ChIP(Chromatin Immunoprecipitation)를 사용한 예쁜꼬마선충(C. elegans )의 세대 간 후성유전학적 유전 분석

세대 간 후성유전학적 유전(TEI)은 비코딩 RNA 및 염색질 변형과 같은 요인을 통해 게놈 염기서열을 변경하지 않고 생식세포를 통해 정보를 전달할 수 있습니다. 예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans )의 RNA 간섭(RNAi) 유전 현상은 이 모델 유기체의 짧은 수명 주기, 자가 증식 및 투명성을 활용하는 TEI를 조사하는 데 효과적인 모델입니다. RNAi 유전에서 동물이 RNAi에 노출되면 표적 자리에서 유전자 침묵 및 변경된 염색질 서명이 발생하며, 이는 초기 유발 요인이 없는 상태에서 여러 세대 동안 지속됩니다. 이 프로토콜은 생식세포로 발현된 핵 녹색 형광 단백질(GFP) 리포터를 사용하여 예쁜꼬마선충(C. elegans )의 RNAi 유전 분석을 설명합니다. 리포터 침묵은 GFP를 표적으로 하는 이중 가닥 RNA를 발현하는 박테리아를 동물에게 먹이는 것으로 시작됩니다. 각 세대에서 동물은 동기화된 발달을 유지하기 위해 통과되며, 리포터 유전자 침묵은 현미경으로 결정됩니다. 선택된 세대에서, 집단은 GFP 리포터 자리에서 히스톤 변형 농축을 측정하기 위해 염색질 면역침전 (ChIP) - 정량 중합효소 연쇄 반응 (qPCR)을 위해 수집 및 처리됩니다. RNAi 유전을 연구하기 위한 이 프로토콜은 쉽게 수정될 수 있으며 다른 분석과 결합하여 작은 RNA 및 염색질 경로에서 TEI 인자를 추가로 조사할 수 있습니다.