Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Эмбрионы осы Nasonia препарировали из куколок Lucillia sericata после паразитирования в течение 12-24 ч и промывали спиртом и 10% раствором гипохлорита натрия для получения безмикробных эмбрионов. После выращивания безмикробных эмбрионов и снабжения их средой для выращивания Nasonia для роста и развития in vitro были получены взрослые особи Nasonia без микробов.

Abstract

Технология асептического выращивания – это метод культивирования насекомых в стерильных или почти стерильных условиях, который позволяет эффективно исключить влияние внешних микроорганизмов на микробиоту насекомых и тем самым способствовать быстрому развитию исследований микробиоты насекомых. Nasonia (род ос) - это паразитическое насекомое-оса, которое имеет много преимуществ, таких как короткая продолжительность жизни, высокая генетическая изменчивость, простота в эксплуатации и т. д., и широко используется в качестве модельной системы насекомых. В отличие от лечения антибиотиками, которое может только уменьшить количество микроорганизмов у животных, методы асептического выращивания могут контролировать как состав, так и количество микроорганизмов у животных, что еще больше облегчает изучение взаимодействий хозяина и микроба. Однако предыдущие версии среды для выращивания Nasonia (NRM) имеют некоторые дефекты и проблемы, такие как сложный и трудоемкий процесс приготовления, легкое загрязнение бактериями или грибками и короткое время хранения. Таким образом, данное исследование решает эти проблемы за счет оптимизации инструментов, используемых в процессе подготовки NRM, условий хранения и соотношения компонентов. Оптимизированная среда может обеспечить хранение при -20 °C в течение не менее 3 месяцев и исключить возможность загрязнения NRM во время кормления стерильных ос. Это еще больше улучшает выживаемость и уровень здоровья асептической Nasonia, что важно для использования Nasonia в качестве модели для микробных исследований.

Introduction

Безмикробные животные - это животные, у которых нет обнаруживаемых живых микроорганизмов и паразитов1. Эмбрионы, не содержащие зародышей, могут быть получены путем вскрытия матери в асептических условиях и впоследствии выращены в барьерных системах2. Такие животные могут быть использованы для изучения воздействия микроорганизмов на животных, таких как кишечная микробиота, иммунная система и метаболизм1. С помощью определенных технических средств многие насекомые и даже млекопитающие могут быть стерильны 3,4. Безмикроб....

Protocol

1. Приготовление безмикробнойсреды для выращиваниянасонии 

  1. Поместите имеющихся в продаже куколок L. sericata (см. Таблицу материалов) на поверхность, на которой могут разместиться все куколки, например, на лоток или лист бумаги. Выбросьте все недор?.......

Representative Results

Эффективность подготовки NRM была значительно улучшена за счет совершенствования инструментов подготовки. Кроме того, проблема загрязнения NRM в процессе кормления была устранена за счет оптимизации стратегии и метода сохранения. В то же время скорректированный NRM имел более подходящее.......

Discussion

С применением высокопроизводительных технологий обнаружения, таких как геномика и метаболомика, исследователи постепенно осознали, что в микробиоте кишечника существует огромное генетическое разнообразие и сложность метаболизма16. Эти симбиотические бактерии тесно свя.......

Acknowledgements

Финансирование: эта работа была поддержана Национальным научным фондом Китая (32270538), Национальной ключевой программой исследований и разработок Китая (2022YFF0710603), Фондом естественных наук Пекина (6222046) и стратегическим финансированием CAS через схему финансирования CAS-CSIRO (152111KYSB20210011), присужденную G.H.W. Вклад авторов: все авторы разработали объем и направленность обзора и внесли свой вклад в написание рукописи.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
0.22 Sterile vacuum filterNEST331011
10% SodiumHypochloriteLIRCONXB-84BS-1
1x PBS solutionSolarbioP1020
200 mesh nylon netBIOBYINGBY-378Z
24 well-plateNEST702001
8, 1.2, 0.8, and 0.45 µm filtersShanghai Xingya Purification Material FactoryHN-AA-JT-10079
Absolute ethyl alcoholMacklinE809057-500ml
Cell StrainerBIOLOGIX15-1100
Commercial Drosophila MediumBoerB645446-500ml
Dissecting needleBioroyee17-9140
Garlic pressTaobaoNo Catalog numbersPurchase on Taobao
Lucillia sericata pupaeHefei Dayuan Biotechnology Co., Ltd.No Catalog numbersPurchase on Taobao
Small writing brushCestidurBL0508
StereoscopeSOPTOPRX50
TweezersSALMARTA109001-56

References

  1. Diviccaro, S., et al. Exploring the impact of the microbiome on neuroactive steroid levels in germ-free animals. International Journal of Molecular Sciences. 22 (22), 12551 (2021).
  2. Pang, X., et al.

Explore More Articles

197Nasonia

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved