حبات معدلة بالبورفيرين لاستخدامها كضوابط تعويض في قياس التدفق الخلوي

يمكن لقياس التدفق الخلوي توصيف وقياس مجموعات الخلايا المتنوعة بسرعة بناء على قياسات مضان. يتم تلطيخ الخلايا أولا بواحد أو أكثر من الكواشف الفلورية ، كل منها يعمل بجزيء فلوري مختلف (فلوروفور) يرتبط بالخلايا بشكل انتقائي بناء على خصائصها المظهرية ، مثل تعبير مستضد سطح الخلية. يمكن قياس شدة التألق من كل كاشف مرتبط بالخلايا على مقياس التدفق الخلوي باستخدام القنوات التي تكتشف نطاقا محددا من الأطوال الموجية. عند استخدام العديد من الفلوروفورات ، غالبا ما يمتد الضوء من الفلوروفورات الفردية إلى قنوات الكشف غير المرغوب فيها ، الأمر الذي يتطلب تصحيحا لبيانات شدة التألق في عملية تسمى التعويض.

هناك حاجة إلى جزيئات التحكم في التعويض ، وعادة ما تكون حبات البوليمر المرتبطة بفلوروفور واحد ، لكل فلوروفور يستخدم في تجربة وضع العلامات على الخلايا. تستخدم البيانات من جزيئات التعويض من مقياس التدفق الخلوي لتطبيق تصحيح لقياسات شدة التألق. يصف هذا البروتوكول تحضير وتنقية حبات تعويض البوليسترين التي تعمل تساهميا مع الكاشف الفلوري meso-tetra (4-carboxyphenyl) porphine (TCPP) وتطبيقها في تعويض قياس التدفق الخلوي. في هذا العمل ، تمت معالجة حبات البوليسترين الوظيفية بالأمين باستخدام TCPP وكاشف اقتران الأميد EDC (N- (3-dimethylaminopropyl) -N′-ethylcarbodiimide hydrochloride) عند الرقم الهيدروجيني 6 وفي درجة حرارة الغرفة لمدة 16 ساعة مع التقليب. تم عزل حبات TCPP عن طريق الطرد المركزي وإعادة تعليقها في مخزن مؤقت pH 7 للتخزين. لوحظت الجسيمات المرتبطة ب TCPP كمنتج ثانوي. يمكن تقليل عدد هذه الجسيمات باستخدام بروتوكول ترشيح اختياري. تم استخدام حبات TCPP الناتجة بنجاح على مقياس التدفق الخلوي للتعويض في التجارب مع خلايا البلغم البشرية الموسومة بفلوروفورات متعددة. أثبتت حبات TCPP أنها مستقرة بعد تخزينها في الثلاجة لمدة 300 يوم.