फ्लो साइटोमेट्री में मुआवजा नियंत्रण के रूप में उपयोग के लिए पोर्फिरीन-संशोधित मोती

फ्लो साइटोमेट्री फ्लोरेसेंस माप के आधार पर विभिन्न सेल आबादी को तेजी से चिह्नित और निर्धारित कर सकती है। कोशिकाओं को पहले एक या एक से अधिक फ्लोरोसेंट अभिकर्मकों से दाग दिया जाता है, प्रत्येक को एक अलग फ्लोरोसेंट अणु (फ्लोरोफोरे) के साथ कार्यात्मक किया जाता है जो कोशिकाओं को उनकी फेनोटाइपिक विशेषताओं, जैसे सेल सतह एंटीजन अभिव्यक्ति के आधार पर चुनिंदा रूप से बांधता है। कोशिकाओं से बंधे प्रत्येक अभिकर्मक से प्रतिदीप्ति की तीव्रता को प्रवाह साइटोमीटर पर चैनलों का उपयोग करके मापा जा सकता है जो तरंग दैर्ध्य की एक निर्दिष्ट सीमा का पता लगाते हैं। जब कई फ्लोरोफोर का उपयोग किया जाता है, तो अलग-अलग फ्लोरोफोर से प्रकाश अक्सर अवांछित पहचान चैनलों में फैल जाता है, जिसके लिए मुआवजे नामक प्रक्रिया में प्रतिदीप्ति तीव्रता डेटा में सुधार की आवश्यकता होती है।

मुआवजा नियंत्रण कण, आमतौर पर एक एकल फ्लोरोफोरे से बंधे बहुलक मोती, सेल लेबलिंग प्रयोग में उपयोग किए जाने वाले प्रत्येक फ्लोरोफोर े के लिए आवश्यक होते हैं। फ्लो साइटोमीटर से मुआवजा कणों से डेटा का उपयोग प्रतिदीप्ति तीव्रता माप में सुधार लागू करने के लिए किया जाता है। यह प्रोटोकॉल फ्लोरोसेंट अभिकर्मक मेसो-टेट्रा (4-कार्बोक्सीफिनाइल) पोर्फिन (टीसीपीपी) और फ्लो साइटोमेट्री मुआवजे में उनके आवेदन के साथ सहसंयोजक रूप से कार्यात्मक पॉलीस्टाइनिन मुआवजा मोतियों की तैयारी और शुद्धि का वर्णन करता है। इस काम में, अमाइन-कार्यात्मक पॉलीस्टाइनिन मोतियों को टीसीपीपी और एमाइड युग्मन अभिकर्मक ईडीसी (एन-(3-डाइमिथाइलएमिनोप्रोपिल)-एन'-एथिलकार्बोडिमाइड हाइड्रोक्लोराइड) के साथ पीएच 6 पर और आंदोलन के साथ 16 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर इलाज किया गया था। टीसीपीपी मोतियों को सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा अलग किया गया था और भंडारण के लिए पीएच 7 बफर में फिर से निलंबित कर दिया गया था। टीसीपीपी से संबंधित कणों को एक उपोत्पाद के रूप में देखा गया था। वैकल्पिक निस्पंदन प्रोटोकॉल का उपयोग करके इन कणों की संख्या को कम किया जा सकता है। परिणामी टीसीपीपी मोतियों को कई फ्लोरोफोरे के साथ लेबल किए गए मानव थूक कोशिकाओं के साथ प्रयोगों में मुआवजे के लिए प्रवाह साइटोमीटर पर सफलतापूर्वक उपयोग किया गया था। 300 दिनों के लिए रेफ्रिजरेटर में भंडारण के बाद टीसीपीपी मोती स्थिर साबित हुए।