الكشف الكمي عن الروابط المتقاطعة بين الحمض النووي والبروتين وتعديلاتها اللاحقة للترجمة

الروابط المتقاطعة لبروتين الحمض النووي (DPCs) هي آفات الحمض النووي المتكررة والمنتشرة في كل مكان والضارة ، والتي تنشأ من تلف الحمض النووي الداخلي ، أو خلل في الإنزيم (topoisomerases ، methyltransferases ، إلخ) ، أو العوامل الخارجية مثل العلاج الكيميائي وعوامل التشابك. بمجرد تحفيز DPCs ، يتم على الفور اقتران عدة أنواع من التعديلات اللاحقة للترجمة (PTMs) بها كآليات استجابة مبكرة. لقد ثبت أنه يمكن تعديل DPCs بواسطة ubiquitin ، ومعدل صغير يشبه ubiquitin (SUMO) ، و poly-ADP-ribose ، والتي تهيئ الركائز للإشارة إلى إنزيمات الإصلاح المخصصة لها ، وفي بعض الحالات ، تنسيق الإصلاح بطرق متسلسلة. نظرا لأن PTMs تظهر بسرعة ويمكن عكسها بشكل كبير ، فقد كان من الصعب عزل واكتشاف DPCs المترافقة PTM التي تظل عادة عند مستويات منخفضة. يظهر هنا مقايسة مناعية لتنقية واكتشاف DPCs في كل مكان و SUMOylated و ADP ريبوزيلات (توبويزوميراز DPCs التي يسببها الدواء و DPCs غير المحددة التي يسببها الألدهيد) في الجسم الحي. هذا الفحص مشتق من اختبار RADAR (النهج السريع لاستعادة تقريب الحمض النووي) الذي يستخدم لعزل الحمض النووي الجينومي الذي يحتوي على DPCs عن طريق ترسيب الإيثانول. بعد التطبيع وهضم النيوكلياز ، يتم الكشف عن PTMs من DPCs ، بما في ذلك الوجود في كل مكان ، SUMOylation ، و ADP-ribosylation ، عن طريق النشاف المناعي باستخدام الأجسام المضادة المقابلة لها. يمكن استخدام هذا الفحص القوي لتحديد وتوصيف الآليات الجزيئية الجديدة التي تعمل على إصلاح DPCs الأنزيمية وغير الأنزيمية ولديها القدرة على اكتشاف مثبطات الجزيئات الصغيرة التي تستهدف عوامل محددة تنظم PTMs لإصلاح DPCs.