DNA-蛋白质交联及其翻译后修饰的定量检测

DNA-蛋白质交联 （DPC） 是常见、普遍存在且有害的 DNA 病变，由内源性 DNA 损伤、酶（拓扑异构酶、甲基转移酶等）功能障碍或外源性药物（如化疗药物和交联剂）引起。一旦诱导DPC，几种类型的翻译后修饰（PTM）就会迅速结合为早期反应机制。已经表明，DPC可以通过泛素，小泛素样修饰剂（SUMO）和聚ADP-核糖进行修饰，它们启动底物以发出各自指定的修复酶信号，并且在某些情况下以顺序方式协调修复。由于PTM快速发生且具有高度可逆性，因此分离和检测通常保持在低水平的PTM偶联DPC一直具有挑战性。这里介绍的是一种免疫测定法，用于纯化和定量检测 体内泛素化、SUMO化和ADP核糖基化的DPC（药物诱导的拓扑异构酶DPC和醛诱导的非特异性DPC）。该测定源自RADAR（DNA加合物回收快速方法）测定，该测定用于通过乙醇沉淀分离含有DPC的基因组DNA。归一化和核酸酶消化后，通过使用相应的抗体进行免疫印迹检测 DPC 的 PTM，包括泛素化、SUMO化和 ADP-核糖基化。这种稳健的测定可用于鉴定和表征修复酶促和非酶促DPC的新分子机制，并有可能发现针对调节PTM以修复DPC的特定因子的小分子抑制剂。