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Genetics

दुर्लभ सेल आबादी में प्रमोटर-केंद्रित स्थानिक-अस्थायी जीनोम आर्किटेक्चर का अध्ययन करने के लिए एक एकीकृत वर्कफ़्लो

Published: April 21st, 2023

DOI:

10.3791/65316

1Josep Carreras Leukaemia Research Institute, 2Barcelona Supercomputing Center, 3Catalan Institution for Research and Advanced Studies (ICREA), 4Institute for Health Science Research Germans Trias i Pujol

* These authors contributed equally

Abstract

स्पैटियोटेम्पोरल जीन ट्रांसक्रिप्शन को डिस्टल नियामक तत्वों द्वारा कसकर विनियमित किया जाता है, जैसे कि एन्हांसर और साइलेंसर, जो प्रतिलेखन को नियंत्रित करने के लिए अपने लक्ष्य जीन प्रमोटरों के साथ भौतिक निकटता पर भरोसा करते हैं। यद्यपि इन नियामक तत्वों की पहचान करना आसान है, उनके लक्ष्य जीन की भविष्यवाणी करना मुश्किल है, क्योंकि उनमें से अधिकांश सेल-प्रकार विशिष्ट हैं और रैखिक जीनोम अनुक्रम में सैकड़ों किलोबेस द्वारा अलग किए जा सकते हैं, अन्य गैर-लक्ष्य जीनों पर छोड़ दिए जा सकते हैं। कई वर्षों से, प्रमोटर कैप्चर हाई-सी (पीसीएचआई-सी) अपने लक्षित जीन के लिए डिस्टल नियामक तत्वों के जुड़ाव के लिए स्वर्ण मानक रहा है। हालांकि, पीसीएचआई-सी लाखों कोशिकाओं की उपलब्धता पर निर्भर करता है, जो दुर्लभ कोशिका आबादी के अध्ययन को प्रतिबंधित करता है जैसे कि आमतौर पर प्राथमिक ऊतकों से प्राप्त। इस सीमा को दूर करने के लिए, कम इनपुट कैप्चर हाई-सी (एलआईसीएचआई-सी), जीनोम के प्रत्येक जीन को नियंत्रित करने वाले डिस्टल नियामक तत्वों के प्रदर्शनों की पहचान करने के लिए एक लागत प्रभावी और अनुकूलन योग्य विधि विकसित की गई है। LICHI-C PCHI-C के समान प्रयोगात्मक और कम्प्यूटेशनल ढांचे पर निर्भर करता है, लेकिन न्यूनतम ट्यूब परिवर्तनों को नियोजित करके, अभिकर्मक एकाग्रता और मात्रा को संशोधित करके, और चरणों की अदला-बदली या समाप्त करके, यह पुस्तकालय निर्माण के दौरान न्यूनतम सामग्री हानि के लिए जिम्मेदार है। सामूहिक रूप से, LICHI-C विकासात्मक जीव विज्ञान और सेलुलर फ़ंक्शन के संदर्भ में जीन विनियमन और स्थानिक जीनोम संगठन के अध्ययन को सक्षम बनाता है।

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