Realtidsmätningar av kalcium- och kontraktilitetsparametrar i humaninducerade pluripotenta stamcellshärledda kardiomyocyter

Humaninducerade pluripotenta stamcellshärledda kardiomyocyter (hiPSC-CMs) representerar ett kraftfullt verktyg för att studera mutationsmedierade förändringar i kardiomyocytfunktionen och definiera effekterna av stressorer och läkemedelsinterventioner. I denna studie demonstreras att detta optikbaserade system är ett kraftfullt verktyg för att bedöma de funktionella parametrarna för hiPSC-CM i 2D. Genom att använda denna plattform är det möjligt att utföra parade mätningar i en välbevarad temperaturmiljö på olika plattlayouter. Dessutom ger detta system forskare omedelbar dataanalys.

Detta dokument beskriver en metod för att mäta kontraktilitet av omodifierade hiPSC-CM. Kontraktionskinetiken mäts vid 37 °C baserat på pixelkorrelationsförändringar i förhållande till en referensram som tagits vid avkoppling vid en samplingsfrekvens på 250 Hz. Dessutom kan samtidiga mätningar av intracellulära kalciumtransienter förvärvas genom att ladda cellen med en kalciumkänslig fluorofor, såsom Fura-2. Med hjälp av en hyperswitch kan ratiometriska kalciummätningar utföras på en belysningspunkt med en diameter på 50 μm, motsvarande arean för kontraktilitetsmätningarna.