Venstre atriel ligering i fugleembryoet som model for ændret hæmodynamisk belastning under tidlig vaskulær udvikling

På grund af sin firekammerede modne ventrikulære konfiguration, lette kultur, billeddannelsesadgang og effektivitet er fugleembryoet en foretrukken hvirveldyrmodel til undersøgelse af kardiovaskulær udvikling. Undersøgelser, der sigter mod at forstå den normale udvikling og medfødt hjertefejlprognose, vedtager i vid udstrækning denne model. Mikroskopiske kirurgiske teknikker introduceres for at ændre de normale mekaniske belastningsmønstre på et specifikt embryonalt tidspunkt og spore den nedstrøms molekylære og genetiske kaskade. De mest almindelige mekaniske indgreb er venstre vitelline veneligering, conotruncal banding og venstre atriel ligering (LAL), modulering af det intramurale vaskulære tryk og vægforskydningsspænding på grund af blodgennemstrømning. LAL, især hvis det udføres i ovo, er den mest udfordrende intervention med meget små prøveudbytter på grund af de ekstremt fine sekventielle mikrokirurgiske operationer. På trods af sin høje risiko er in ovo LAL meget værdifuld videnskabeligt, da det efterligner hypoplastisk venstre hjertesyndrom (HLHS) patogenese. HLHS er en klinisk relevant, kompleks medfødt hjertesygdom observeret hos nyfødte. En detaljeret protokol for in ovo LAL er dokumenteret i dette papir. Kort fortalt blev befrugtede fugleembryoner inkuberet ved 37,5 °C og 60% konstant fugtighed, typisk indtil de nåede Hamburger-Hamilton (HH) trin 20 til 21. Æggeskallerne blev revnet op, og de ydre og indre membraner blev fjernet. Embryoet blev forsigtigt drejet for at udsætte den venstre atriale pære i det fælles atrium. Formonterede mikroknuder fra 10-0 nylonsuturer blev forsigtigt placeret og bundet rundt om venstre atriefnop. Endelig blev embryoet returneret til sin oprindelige position, og LAL blev afsluttet. Normale og LAL-instrumenterede ventrikler viste statistisk signifikante forskelle i vævskomprimering. En effektiv LAL-modelgenereringspipeline vil bidrage til undersøgelser, der fokuserer på synkroniseret mekanisk og genetisk manipulation under embryonal udvikling af kardiovaskulære komponenter. Ligeledes vil denne model give en forstyrret cellekilde til vævskulturforskning og vaskulær biologi.