Etablering af blandede neuronale og gliacellekulturer fra embryonale musehjerner for at studere infektion og medfødt immunitet

Modeller af centralnervesystemet (CNS) skal rekapitulere det komplekse netværk af sammenkoblede celler, der findes in vivo. CNS består primært af neuroner, astrocytter, oligodendrocytter og mikroglia. På grund af den stigende indsats for at erstatte og reducere brugen af dyr er der udviklet en række in vitro-cellekultursystemer for at udforske medfødte celleegenskaber, som muliggør udvikling af lægemidler til CNS-infektioner og patologier. Mens visse forskningsspørgsmål kan løses af menneskebaserede cellekultursystemer, såsom (inducerede) pluripotente stamceller, har arbejdet med humane celler sine egne begrænsninger med hensyn til tilgængelighed, omkostninger og etik. Her beskriver vi en unik protokol til isolering og dyrkning af celler fra embryonale musehjerner. De resulterende blandede neurale cellekulturer efterligner flere cellepopulationer og interaktioner, der findes i hjernen in vivo. Sammenlignet med de nuværende ækvivalente metoder efterligner denne protokol hjernens egenskaber og samler også flere celler, hvilket gør det muligt at undersøge flere eksperimentelle tilstande fra en gravid mus. Desuden er protokollen relativt let og meget reproducerbar. Disse kulturer er optimeret til brug i forskellige skalaer, herunder 96-brøndbaserede skærme med høj kapacitet, 24-brønds mikroskopianalyse og 6-brøndkulturer til flowcytometri og revers transkriptionskvantitativ polymerasekædereaktion (RT-qPCR) analyse. Denne kulturmetode er et kraftfuldt værktøj til at undersøge infektion og immunitet inden for rammerne af nogle af kompleksiteten af CNS med bekvemmeligheden ved in vitro-metoder .