Etablering av blandede nevron- og gliacellekulturer fra embryonale musehjerner for å studere infeksjon og medfødt immunitet

Modeller av sentralnervesystemet (CNS) må rekapitulere det komplekse nettverket av sammenkoblede celler som finnes in vivo. CNS består hovedsakelig av nevroner, astrocytter, oligodendrocytter og mikroglia. På grunn av økende innsats for å erstatte og redusere bruk av dyr, har en rekke in vitro cellekultursystemer blitt utviklet for å utforske medfødte celleegenskaper, som tillater utvikling av terapeutiske midler for CNS-infeksjoner og patologier. Mens visse forskningsspørsmål kan løses av menneskebaserte cellekultursystemer, for eksempel (induserte) pluripotente stamceller, har arbeid med humane celler sine egne begrensninger med hensyn til tilgjengelighet, kostnader og etikk. Her beskriver vi en unik protokoll for isolering og dyrking av celler fra embryonale musehjerner. De resulterende blandede nevrale cellekulturer etterligner flere cellepopulasjoner og interaksjoner funnet i hjernen in vivo. Sammenlignet med dagens ekvivalente metoder, etterligner denne protokollen nærmere hjernens egenskaper og får også flere celler, slik at flere eksperimentelle forhold kan undersøkes fra en gravid mus. Videre er protokollen relativt enkel og svært reproduserbar. Disse kulturene er optimalisert for bruk på forskjellige skalaer, inkludert 96-brønnbaserte skjermer med høy gjennomstrømning, 24-brønnsmikroskopianalyse og 6-brønnskulturer for flowcytometri og revers transkripsjon-kvantitativ polymerasekjedereaksjon (RT-qPCR) analyse. Denne kulturmetoden er et kraftig verktøy for å undersøke infeksjon og immunitet i sammenheng med noe av kompleksiteten til CNS med bekvemmeligheten av in vitro-metoder .