Universele moleculaire retentie met 11-voudige expansiemicroscopie

De beeldvorming op nanoschaal van biologische specimens kan het begrip van ziektepathogenese verbeteren. In de afgelopen jaren is aangetoond dat expansiemicroscopie (ExM) een effectief en goedkoop alternatief is voor optische superresolutiemicroscopie. Het is echter beperkt door de behoefte aan specifieke en vaak aangepaste verankeringsmiddelen om verschillende biomolecuulklassen in de gel te behouden en door problemen met het uitbreiden van standaard klinische monsterformaten, zoals formaline-gefixeerd paraffine-ingebed weefsel, vooral als grotere expansiefactoren of geconserveerde eiwit-epitopen gewenst zijn. Hier beschrijven we Magnify, een nieuwe ExM-methode voor robuuste expansie tot 11-voudig in een breed scala aan weefseltypen. Door methacroleïne te gebruiken als het chemische anker tussen het weefsel en de gel, behoudt Magnify meerdere biomoleculen, zoals eiwitten, lipiden en nucleïnezuren, in de gel, waardoor de brede beeldvorming op nanoschaal van weefsels op conventionele optische microscopen mogelijk wordt. Dit protocol beschrijft best practices om robuuste en scheurvrije weefselexpansie te garanderen, evenals tips voor het hanteren en afbeelden van sterk uitgebreide gels.