11 Katlı Genişleme Mikroskobu ile Üniversal Moleküler Retansiyon

Biyolojik örneklerin nano ölçekli görüntülenmesi, hastalık patogenezinin anlaşılmasını iyileştirebilir. Son yıllarda, genleşme mikroskobunun (ExM) optik süper çözünürlüklü mikroskopiye etkili ve düşük maliyetli bir alternatif olduğu gösterilmiştir. Bununla birlikte, jel içinde farklı biyomolekül sınıflarını tutmak için spesifik ve genellikle özel ankraj ajanlarına duyulan ihtiyaç ve özellikle daha büyük genişleme faktörleri veya korunmuş protein epitopları isteniyorsa, formalinle sabitlenmiş parafine gömülü doku gibi standart klinik numune formatlarının genişletilmesindeki zorluklarla sınırlandırılmıştır. Burada, çok çeşitli doku tiplerinde 11 kata kadar sağlam genişleme için yeni bir ExM yöntemi olan Magnify'ı açıklıyoruz. Magnify, doku ve jel arasındaki kimyasal çapa olarak metakrolein kullanarak, jel içinde proteinler, lipitler ve nükleik asitler gibi çoklu biyomolekülleri tutar ve böylece dokuların geleneksel optik mikroskoplarda geniş nano ölçekli görüntülenmesine olanak tanır. Bu protokol, sağlam ve çatlaksız doku genişlemesini sağlamak için en iyi uygulamaları ve ayrıca yüksek oranda genişlemiş jellerin işlenmesi ve görüntülenmesi için ipuçlarını açıklar.